荧光显微镜技术的介绍
荧光显微镜技术是一个强大的分析工具,它结合了光学显微镜的放大属性和荧光的可见属性。荧光现象中被称为荧光集团的荧光分子吸收或者释放小范围内的光波。荧光显微镜是在基本光学显微镜的基础上,加入了强力光源、特殊的滤光片、以及使用了荧光标记的样品。本短片讲述了荧光显微镜的基本原理,包括荧光形成的机制:斯托克丝位移和光漂白。视频还给出了多种荧光标记的方法,例如使用荧光标记的抗体或者蛋白质、核酸荧光染料、以及向样品中加入可以自然发出荧光的蛋白质;荧光显微镜中的主要组件包括氙光灯源或者水银灯源、滤光灯片、分色镜、以及使用光栅来照射样品,都将被描述。最后还演示了荧光显微镜的许多应用中的一些例子。
制备组织学样品用于光学显微镜技术
组织学是指对细胞和组织的研究,它通常需要借助于光学显微镜。根据样品本身属性如大小,硬度以及处理后使用的染色技术和下游应用的不同,制备组织学样品的过程也会有很大不同。如本视频中介绍的,样品的制备通常是从固定步骤开始,用以防止濒临死亡细胞所释放出的酶对样品的降解。固定后,样品会被置于包埋试剂来使样品完全被支撑起来。最常用的是石蜡,但是其他的一些试剂,例如含甘油的冷冻试剂和琼脂也可以在切片的时候用于包埋样品。然后在切片机或其他切片仪器中将样品切割成厚度为几微米到几毫米的薄片。切片之后,薄片会被固定在载玻片上,根据需要进行染色以获得特定的标记,而后在显微镜下成像。
机器人减肥手术
这个3D医学动画,描述了两种最常见的减肥手术,通过机器人来实现的。这些手术包括放置一个可调的胃束带,或迭缝带环,并创建一个胃囊。该动画提供了,在减肥手术中使用机器人技术的器械和手术室设置等。
用SDS-PAGE技术分离蛋白
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,也称SDS-PAGE,是一种被广泛使用,仅根据分子量大小来分离蛋白质混合物的技术。阴离子去污剂SDS,在变性的线性蛋白表面沿长度均匀分布使其带电。将它们上样到聚丙烯酰胺凝胶后,施加电压,这些表面覆盖SDS的蛋白将被分开。电场作为驱动力,牵引SDS结合的蛋白朝阳极移动,分子量大的蛋白将比小的蛋白移动慢。为了判断蛋白的大小,已知分子量大小的蛋白质标准也会和样品一起上样并在同等条件下跑胶。
本短片介绍SDS-PAGE技术,首先将解释其背后的原理,然后演示每一步的操作过程。视频还将讨论实验中的各种参数,如聚丙烯酰胺浓度,和用于跑胶的电压。还会介绍电泳之后的考马斯亮蓝和银染色方法,以及其他电泳技术,如双向凝胶电泳。
斑马鱼显微注射技术
采用斑马鱼做为模型的一个突出优点是对它们进行遗传操作非常方便,对它们的早期胚胎进行显微注射即可。通过这种技术,含有遗传物质或者沉默表达框架的的溶液会被注入囊胚细胞:它们是位于新受精卵卵黄上方的胚胎细胞。将遗传物质导入细胞质一般是通过直接注射囊胚细胞,或者先注入卵黄再通过细胞质的自然流动导入囊胚细胞。成功的遗传学操作会带来一定数量的胚胎表型,用于阐明其发育的遗传学机制。
本短片介绍了斑马鱼胚胎的显微注射。我们将先回顾该技术的基本工具,包括注射装置和显微注射器,它可以通过空气压力脉冲来控制液体的流动。然后会阐述重要的准备工作,例如灌制琼脂板,用以在注射过程中稳定胚胎,以及校正显微注射装置。接下来我们会展示显微注射过程包括什么时候在什么部位注射等实验技巧。最后,我们会讨论显微注射技术的应用,包括通过mRNA注射获得基因过量表达,通过注射反义吗啉环寡核苷酸来沉默基因,以及利于经过特殊基因工程操作的质粒DNA产生转基因斑马鱼。
膜片钳电生理技术
神经元细胞膜上有离子通道,它们控制电荷流入和流出细胞,从而调节神经元激发。一种用于研究这些通道的生物物理学特性的极为有用的技术被称为膜片钳记录。在这种方法中,神经科学家把抛光的玻璃微吸管置于细胞上通过吸力形成高电阻封接。这个过程分隔了一小"片"包含一种或多种离子通道的膜。通过微吸管中的电极,研究人员可以"钳制"或控制膜的电属性,这对分析通道活动很重要。该电极还能记录跨膜电压的变化,或离子通过膜的流动。
本短片首先回顾了膜片钳电生理学的原理,介绍了必要的设备,描述了各种类型的膜片钳测量模式,其中包括全细胞式,细胞粘附式,穿孔式,内翻外式和外翻外式膜片钳。接下来,概述了一个典型的全细胞膜片钳实验的关键步骤,并做了电流-电压(IV)曲线。最后,我们提供了膜片钳记录的应用以演示如何在当今的神经生理学实验室里评估离子通道的生物物理学特性,细胞的兴奋性,和神经活性化合物。
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啮齿动物的立体定位手术
立体定向(或立体)手术是一种用来操作活体动物大脑的方法。该技术使得研究人员能够通过使用立体定位图谱准确地定位大脑内的深层结构。立体定位图谱提供了每个脑区相对于颅骨上的解剖学标志的三维坐标。将颅骨暴露后,麻醉的动物被固定在被称为立体定位仪的专门仪器上,该仪器能使实验工具精确放置在定好的坐标上。立体定位手术是一项用途广泛的技术,可用来产生损伤,操纵基因表达,或将实验试剂施加到大脑里。
本视频文章概述了立体定位手术的原理,包括使用立体定位图谱和立体定位仪的说明,并介绍了读取测量探头移动的游标刻度的方法。随后的讨论概括了手术过程所需的步骤。最后,展示了该技术的广泛应用,如插入电极探针以测量大脑活动以及脑组织的遗传操作方法。
生物技术的职业生涯
Dr. Tessier-Lavigne is Executive Vice-President of Research and Chief Scientific Officer at Genentech where he is responsible for directing all basic and disease research and drug discovery efforts. He also maintains his own research group focused on the wiring of the developing brain, as well as neuronal re-wiring after injury and the process of neurodegeneration.
基因打靶技术的产生
“如果你强烈地相信一个想法,有时你需要采取一些风险去追求它。”这是2007诺贝尔生理学或医学奖得主之一,马里奥·卡佩奇的看法,本短片讲述他从小鼠组织培养细胞中发展基因打靶技术的历程。