免疫荧光实验方法

免疫荧光实验方法

作者：佚名图库来源：本站原创点击数：更新时间：2004-8-16 【我来说两句】

Drain off culture medium and rinse cover slips with PBS.

Drain off PBS with any of the above mentioned fixation methods.

Wash in PBS 3-times 5 min.

Permeabilize with 0.01% Triton X-100 in PBS for 30 sec (if needed).

Wash in PBS 3-times 5 min

Incubate in 1% BSA, PBS pH 7.5 for 30 min to block unspecific binding of the antibodies.

(alternative blocking solutions are: 1 % gelatine, 1 % bovine or horse serum)

Incubate with primary antibody in 1% BSA, PBS pH 7.5 for 60 min (or over night at r.t. depending on antibody concentration and the accessibility of the antigen).

Wash with PBS pH 7.5, 3-times 10 min.

Incubate 2nd antibody in 1% BSA, PBS pH 7.5, 60 min at r.t.; e.g., goat anti-rabbit Texas Red (Accurate), 1:80

Wash with PBS pH 7.5, 3-times 10 min.

Optional:

Incubate in 0.1-1 mg/ml Hoechst or DAPI (DNA stain) for 1 min.
Rinse with PBS.
Mount in PPD-mounting medium (90% glycerol).
Seal with nail polish.

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