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| RealMasterMix与质粒大提系列 |
| 来源：TIANGEN 点击数： 更新时间：2006-12-4 9:37:07 【我来说两句】 |
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首购超值体验，精彩伴您同行！ 促销活动时间：2006年12月1日－2006年12月31日
促销信息：
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产品简介：
一、荧光定量技术简介
荧光定量PCR技术是基于使用荧光染料或荧光探针基础上对PCR反应过程进行实时监控的技术。与传统的PCR技术的区别在于荧光定量PCR技术提供了核酸模板的定量方法，而后者关注PCR扩增的结果。可以说现代分子技术中涉及到基因表达和定量的实验过程都已经引入了荧光定量PCR技术，而传统的半定量方法基本不再使用。
实时荧光定量PCR的特点:
（1）特异：荧光定量PCR具有引物和探针的双重特异性，故与传统的PCR相比，特异性大为提高。
（2）敏感：荧光定量PCR的敏感度通常达102拷贝/ml，对数期分析，线性范围很宽，为0-1011拷贝/ml。一般来讲临床标本中病原体的数目为0-1010/拷贝，在此范围内荧光定量PCR定量较为准确，标本不需稀释。
（3）重复：荧光定量PCR结果相当稳定，因为域值设置在指数扩增期。在此阶段，各反应组分浓度相对稳定，没有副作用，CT与荧光信号的对数呈线性关系。与终点法相比CT值能更稳定，更精确地反映起始模板的拷贝数。
（4）安全：无PCR后续操作步骤，降低产物污染的风险性。
二、荧光定量PCR实验中的关键因素
（1）荧光染料：
荧光定量PCR中的荧光染料或荧光标记引物可以与PCR产物结合并为检测元件所检测到。选择合适的荧光染料是关键的一环。总体来讲，其原则为：荧光染料或引物与PCR双链产物的结合是专一性的，容易被激发同时背景低且易被仪器检测到，价格比较合适。
SYBR Green 是一种能够与双链DNA小沟结合的染料。没有与双链DNA结合时，其荧光信号很弱，当其与双链DNA结合后荧光信号大大增强并能够被仪器检测。利用SYBR Green 这种特点可以检测PCR扩增产物。SYBR Green 的最大吸收波长约为497 nm，发射波长最大约为520 nm。
SYBR Green 在核酸的实时检测方面有很多优点，它能够与体系中所有的双链DNA相结合，无需为不同的模板特殊定制，价格相对较低，是很多实验室开展荧光定量实验的首选。此外，由于一个PCR产物可以与多个SYBR Green 染料相结合，因此SYBR Green 的灵敏度很高。
（2）耐热聚合酶：
基于荧光定量实验的高敏感性，对体系中耐热聚合酶的特异性要求很高。目前基本采用热启动耐热聚合酶进行定量反应，避免非特异性产物造成信号的偏差。
（3）引物：引物的长度在18－24个之间，特异性好，同时没有降解的情况。
（4）缓冲体系：
稳定可靠的缓冲体系是实验成功的前提，需要注意的有：体系无核酸分子污染、适合较长时间的PCR反应、镁离子的浓度适当保证聚合酶的活性。
实验结果图片：
实验结果图片：
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