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试剂中文名 |
试剂英文名 |
备注 |
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Tris碱 |
Tris, base |
MW 121.14 |
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丙烯酰胺 |
Acrylamide |
生工F-2：100g, 140元，BBI产，Cat#: AB1032 |
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双丙烯酰胺 |
Bis- Acrylamide |
生工：Cat#: BB0025 |
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SDS |
生工F-110：1g, 55元，AMRESCO产，Cat#: S0485 |
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TEMED |
生工：150 ml, 86元，BBI产，Cat#: T0761 |
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过硫酸胺(APS) |
Ammonium Persulfate |
华舜：25g, 42元，Sigma产，Cat#:A6761 |
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甘氨酸 |
Glycine |
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二硫苏糖醇 |
DTT |
生工F-47：1g, 55元，BBI产，Cat#: DB0058 |
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溴酚蓝 |
Bromophenol Blue,Na |
华舜：5g, 70元，AMRESCO产，Cat#: 0312 |
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土温20 |
TWeen 20 |
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甘油 |
Glycerol |
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甲醇 |
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无水乙酸钠 |
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蛋白电泳Marker |
(高范围) |
华舜 |
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蛋白电泳Marker |
(20~220 kd) |
Invitrogen, Cat#: LC5602. (敖永琴, 2270元) |
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丽春红S |
Ponceau S |
华舜也有售，10g, 72元。 |
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氟化钠 |
NaF |
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脱脂奶粉 |
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上海光明牌（Wu XJ用） |
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western blot striping buffer |
PIERCE公司, Cat#: 21059, 吉泰（1043元）、基因公司代理。 |
SDS-PAGE、蛋白转印、Western Blot试剂原料一览表
SDS-PAGE、蛋白转印、Western Blot试剂配制
(***整理，2004.9.6)
1.5 mol/L Tris (PH8.8)
1．称量
2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。
3．用浓盐酸调节pH值至8.8。
4．定容至
5．高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
（参照kara公司Catalog-N1）
1 mol/L Tris (PH6.8)
1．称量
2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。
3．按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。
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pH值 |
浓HCl |
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6.8 |
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7.4 |
约70 ml |
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7.6 |
约60 ml |
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8.0 |
约42 ml |
4．定容至
5．高压灭菌后，室温保存。
注意：1.溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的Tris。
（参照kara公司Catalog-N1）
30％丙稀酰胺（100ml）
1．称量下列试剂置于烧杯中。
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丙烯酰胺（Acrylamide） |
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双丙烯酰胺 (BIS) |
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2．加入约60 ml去离子水，充分搅拌溶解。
3．定容至100 ml, 用0.45 µm滤膜滤去杂质。
5．于棕色瓶中4 oC保存。
注意：1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。
（参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924）
30％ SDS
1．称量
2．加入约800 ml去离子水，68oC加热溶解。
3．滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
4．定容至100 ml，室温保存。
（参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924）
10％ 过硫酸铵
1．称量
2．加入约10 ml去离子水后搅拌溶解。
3．储存于4oC。
注意：10％过硫酸铵溶液在4oC保存时可使用两周左右，超过期限会失去催化作用。
（参照Takara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924）
1×SDS凝胶加样缓冲液
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50 mmol/L |
Tris·Cl (pH 6.8) |
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100 mmol/L |
DTT |
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2% |
SDS （电泳级） |
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0.1% |
溴酚蓝 |
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10% |
甘油 |
不含DTT的1×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，临用前必须从1 mol/L DTT储存液中现用现加于上述缓冲液中。
（参照《分子克隆》二版P884）
本人将参照此配方，配成5×或6×，各成分浓度均扩大5倍。
另:Takara公司Catalog-N5上的5×SDS－PAGE Loading Buffer配方：
组分浓度：
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250 mmol/L |
Tris·Cl (pH 6.8) |
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10% (W/V) |
SDS （电泳级） |
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0.5% (W/V) |
溴酚蓝（BPB） |
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50% (V/V) |
甘油 |
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5% (W/V) |
β-巯基乙醇（2-ME） |
配制量 5 ml
配制方法
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1.25 ml |
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SDS （电泳级） |
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溴酚蓝（BPB） |
25 mg |
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甘油 |
2.5 ml |
2．加去离子水溶解后定容至5 ml。
3．小份（500 ul/份）分装后于室温保存。
4．使用前将25 ul的2-ME加到每小份中。
5．加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。
1 mol/L DTT (20 ml)
1．称取
2．加20 ml的
3．分装后－20oC保存。
（参照《分子克隆》二版P884）
1．称取
2．加冰醋酸调节pH值至5.2。
3．定容至100 ml，高压灭菌后室温保存。
（参照《分子克隆》二版P884）
5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）
组分浓度：0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS
1．称量下列试剂置于烧杯中。
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Tris |
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Glycine |
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10%(W/V) SDS（电泳级） |
50 ml |
2．加入约900 ml去离子水搅拌溶解。
3．定容至