即为基因显微注射法。下面把利用显微注射法制备转基因鼠的方法和步骤简述如下。
1. 超数排卵(超排)与取卵
(1)超数排卵：在雌性动物发情周期的某一阶段,用促性腺激素促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称超数排卵。影响母鼠超排因素有母鼠的性成熟程度、营养、体重及母鼠种系。超排的最佳时间随种系不同而异,一般在3～5周，超过6周超排卵数明显减少。
在实际操作中常取4～6周龄的母鼠作超排卵供体，腹腔注射孕马血清(PMS) 和人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导母鼠排卵。PMS模拟卵泡刺激素(FSH)作用，hCG模拟黄体生成素(LH)的作用。二者注射时间间隔为42～48h，排卵发生在注射hCG后10～13h,注射剂量为每鼠5～10u。为了实验方便，常在下午注射PMS，隔日同一时间注射hCG，注射hCG 后每只母鼠置于一个单独饲养的正常公鼠笼内，次日晨检查阴道栓。
(2)取卵：用颈椎脱臼法处死有阴道栓的雌鼠，把完整的输卵管带一小段子宫剪下,置于PBS平衡盐溶液中，在解剖镜下找出输卵管伞部，用带4号针头的注射器将受精卵冲出，立即将卵子换至新鲜培养液内洗涤3～4次即可用于显微注射。
2. 注射外源DNA：显微注射需用显微操作仪，用来控制显微持卵针和显微注射针。持卵针是显微注射时固定受精卵的细玻璃管，管口平滑，通过一注射器控制持卵针，使其吸住要进行注射的受精卵。用来注射外源DNA的细注射针管表面平滑，尖端锋利,便于注射时穿过透明带、细胞膜等。取已制备好的受精卵细胞和外源DNA悬液,在倒置显微镜下做显微注射。注射时先用持卵针吸住受精卵，再用注射针吸取外源DNA悬液,然后推动注射针，使其刺入受精卵的雄原核，将DNA注入。注射完毕，慢慢抽出注射针,将受精卵放入新的培养液中，使其恢复。一般50～80％的受精卵在显微注射后仍保持健康。
3. 注射后受精卵(或胚胎)的移植：注射后单细胞至桑椹胚的卵(受精后0.5天到3.5天)移植至受孕后的0.5天的假孕鼠的输卵管，输卵管移植需用被透明带包裹的卵。也可将注射有外源DNA的受精卵或桑椹胚体外培养至囊胚，再行移植。显微注射后3.5天的囊胚移植至受孕后2.5天的假孕鼠子宫，子宫移植不需要有透明带。
此法的优点是，在一定设备和经验条件下，实验过程大为简化；任何DNA 顺序都可直接导入原核内,导入的外源DNA在卵裂前与受体基因组整合,其缺点在于导入的外源DNA通常以多拷贝串联的形式随机地整合于受体基因组中，妨碍其表达的正常调节。
(二)逆转录病毒感染法：以逆转录病毒作载体， 把重组的逆转录病毒载体DNA包装成高滴度病毒颗粒，感染发育早期的胚胎，将外源基因导入宿主的染色体内的方法称为逆转录病毒感染法。此法操作简单，可通过注射将重组病毒转移到囊胚腔内，也可将去透明带的胚胎与分泌重组病毒颗粒的细胞共培养，以达到将外源DNA 转移到胚胎中去的目的。
这一方法的优点是，重组逆转录病毒可同时感染大量胚胎。感染后的整合率高；外源DNA在受体细胞基因组中的整合通常是单拷贝的；不需要昂贵的显微注射设备。本法的缺点是，由于选用的受体是早期胚胎，不是受精卵，致使外源DNA 在动物各种组织中的分布不均,不易整合到生殖细胞中；由于病毒衣壳大小有限,限制了被导入的外源 DNA的大小，一般不超过15Kb。
(三)胚胎干细胞介导法：囊胚的内细胞团含有未分化的胚胎干细胞。体外建株的胚胎干细胞称为EK细胞(embryonic karyotype cell)或(embryonic stem cell)。 如果将EK细胞移植到正常发育的囊胚腔中，它们能很快地与受体的内细胞团聚集在一起，参与正常的胚胎发育。用重组的逆转录病毒作为载体感染EK 细胞， 再将此EK细胞移植入受体囊胚腔，可发育成携带着特定外源DNA的个体。
采用这一方法的优点是，外源DNA的整合率高； 整合在生殖细胞中的比例也很高。缺点是，EK细胞株不易建立，长期培养后出现细胞分化现象；生产的转基因动物都是嵌合体。
(四)精子载体法 将外源DNA与精子一起孵育，精子可捕获外源DNA，并通过受精过程将外源DNA导入受精卵。此法不仅可免去复杂而昂贵的设备， 且可省去不少繁杂的操作和条件准备。但该法有些结果不能重复。
此外，还有一些其它的方法，都有不同的优缺点。
五、转基因鼠的检测
待假孕母鼠产出幼仔后,可用幼鼠尾巴提取DNA;对于一些基因调控研究,需要尽快获得信息而暂不需保留转基因鼠，从胎鼠组织或幼鼠尾巴提取的DNA,可用PCR、Dot blot
(斑点杂交)、Southern blot(Southern转移)等多种方法分析以确定是否转基因鼠。
六、基因转移后的存在方式及表达
(一)外源基因导入后的存在方式：外源基因被导入受体细胞后，在受体细胞内的存在方式有三种：
1. 非同源重组。大多数外源基因导入受体细胞后,与受体细胞染色体的某一位点随机整合，这样可带来正常基因的插入、缺失、易位等突变。
2. 同源重组。导入的外源DNA与受体细胞染色体的DNA 通过顺序取代或顺序插入实现同源重组。通过同源重组有可能导致受体细胞正常的基因发生突变，当然，也有可能代替原来的有遗传缺陷的遗传基因，从而纠正遗传缺陷。
3. 游离存在。外源基因没有整合到受体细胞中,而是以附加体的形式游离在受体细胞内，能自我复制，并能100％的传给下一代。
(二)外源基因导入后的表达：外源基因导入受体细胞后能否表达，是受许多因素影响的。
1. 外源基因本身的结构和性质。
2. 附带的原核载体顺序。研究发现，原核载体的存在对α-甲胎蛋白、β- 珠蛋白等基因的表达具有明显的抑制作用，而对
