(三)其它采集精液法:将发情的雌性动物放在雄性动物一起,当雄性动物被刺激发情后,立即将雄性动物分开,再用人工法刺激其射精。也可按摩雄性动物的生殖器或用电刺激其发情中枢或性敏感区,使其射精。
七、阴道内液体的采集
(一)棉拭子法:用消毒棉拭子旋转插入动物阴道内,然后在阴道内轻轻转动几下后取出,即可进行涂片镜检。有的适用如大、小鼠等,阴道液较少,取其阴道液时,可用先浸湿后又挤尽无菌生理盐水的棉拭子取阴道液,这种棉拭子比干棉拭子容易插入阴道。对体型较大的实验动物,也可先按摩或刺激其阴部,而后再采集其阴道液。
(二)滴管法:用消毒的钝头滴管吸取少量的无菌生理盐水插入动物阴道内,然后挤出生理盐水后又吸入,反复几次,吸取阴道冲洗液滴于玻片上制片、染色镜检。
(三)刮取法:用光滑的玻璃小勺或牛角制的小刮片慢慢插入阴道内,在阴道壁轻轻刮取一点阴道内含物,进行涂片镜检。
八、胸水的采集
收集胸水常采用穿刺法。如果实验不要求动物继续存活,也可用处死动物剖胸取胸水。穿刺部位在动物脊侧腋后线胸壁第11~12肋间隙穿刺较安全。此部位是肺最下界之外侧,既可避免损伤肺组织造成气胸,又易采集在隔肋窦的胸水。此外,也可在腹侧胸壁近胸骨左侧缘第4~5肋间隙穿刺。
动物穿刺部位剪毛、消毒,操作者左手拇、食指绷紧肋间穿刺部位的皮肤,用带夹的橡皮管套上12~14号针头,沿肋骨前缘小心地垂直刺入。当有阻力消失或落空感时,表示已穿入胸腔。再接上针管,除去夹子,缓缓抽取胸水。如果有条件在穿刺针头与注射器之间连一个三通管,但应注意正确运用三通管。穿刺结束迅速拔出针头,轻揉穿刺部位,促进针孔闭合并注意消毒。
操作中严防空气进入胸腔,始终保持胸腔负压。穿刺应用手控制针头的深度,以防穿刺过深刺伤肺脏。
九、腹水的采集
抽取狗等大动物腹水,让狗按自然站立位固定,穿刺部位在耻骨前缘与脐之间,腹中线两侧。剪毛消毒,局部浸润麻醉。操作者左手姆、食指紧绷穿刺部位的皮肤,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,以免刺伤内脏。穿刺针进入腹腔后,腹水多时可见因腹压高而自动流出。腹水太少可轻轻回抽,并同时稍稍转动一下针头,一旦有腹水流出,立即固定好针头及注射器的位置连续抽取。
抽取大鼠、小鼠的腹水方法简单,用左手拇指及食指捏住动物颈部皮肤,无名指、小手指及手掌夹住其尾巴固定好动物,使其腹部略朝上,在腹股沟和腹中线之间,消毒皮肤,用8号针头刺入腹腔,如腹压高腹水自然流出,如腹水太少,可借助注射器抽取。
抽腹水时注意不可速度太快,腹水多时不要一次大量抽出,以免因腹压突然下降导致动物出现循环功能障碍等问题。
十、骨髓的采集
1. 大鼠、小鼠骨髓的采集:用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的Hank平衡盐溶液,冲洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作检查,可将胸骨或股骨剪断,将其断面的骨髓挤在有稀释液的玻片上,混匀后涂片凉干即可染色检查。
2. 大动物骨髓的采集:狗等大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法。 先将动物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮肤,然后估计好皮肤到骨髓的距离,把骨髓穿刺针的长度固定好。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧,右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入,穿入固定后,轻轻左右旋转将穿刺针钻入,当穿刺针进入骨髓腔时常有落空感。狗骨髓的采集,一般采用髂骨穿刺。
狗等大动物常用的骨髓穿刺点:胸骨:穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各点的中点。胫骨:穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔,防止发生气胸。
第七节 实验动物的处死
当实验中途停止或结束时,实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物,原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦,也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。
一、蛙 类
常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓的方法处死。将蛙用湿布包住,露出头部,左手执蛙,并用食指按压其头部前端,拇指按压背部,使头前俯;右手持探针由凹陷处垂直刺入,刺破皮肤即入枕骨大孔。这时将探针尖端转向头方,向前深入颅腔,然后向各方搅动,以捣毁脑组织。再把探针由枕骨大孔刺入并转向尾方,刺入椎管,以破坏脊髓。脑和脊髓是否完全破坏,可检查动物四肢肌肉的紧张性是否完全消失。拔出探针后,用一小干棉球将针孔堵住,以防止出血。操作过程中要防止毒腺分泌物射入实验者眼内。如被射入时,则需立即用生理盐水冲洗眼睛。
二、大鼠和小鼠
1. 颈椎脱臼法:右手抓住鼠尾用力向后拉,同时左手拇指与食指用力向下按住鼠头。将脊髓与脑髓拉断,鼠便立即死亡。
2. 断头法:用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉,鼠立即死亡。
3. 击打法:右手抓住鼠尾,提起,用力摔击其头部,鼠痉挛后立即死去。或用木锤用力击打鼠头部也可致死。
4. 急性大出血法:可采用鼠眼眶动脉和静脉急性大量失血方法使鼠立即死亡。
5. 药物致死法:吸入一定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使动物致死。
三、狗、兔、豚鼠
1. 空气栓塞法:向动物静脉内注入一定量的空气,使之发生栓塞而死。当空气注入静脉后,可在右心随着心脏的跳动使空气与血液成泡沫状,随血液循环到全身。如进到肺动脉,可阻塞其分支,进入心脏冠状动脉,造成冠状动脉阻塞,发生严重的血液循环障碍,动物很快致死。一般兔、猫等静脉内注入20~40ml空气即可致死。每条狗由前肢或后肢皮下静脉注入80~150ml空气,可很快致死。
2. 急性失血法:先使动物轻度麻醉,如狗可按每公斤体重静脉注射硫喷妥钠20~30mg,动物即很快入睡。暴露股三角区,用锋利的杀狗刀在股三角区作一个约10厘米的横切口,把股动、静脉全切断,立即喷出血液。用一块湿纱布不断擦去股动脉切口周围处的血液和血凝块,同时不断的用自来水冲洗流血,使股动脉切口保持畅通,动物在3~5分钟内即可致死。采用此种方法,动物十分安静,对脏器无损伤,对活杀采集病理切片标本是一种较好的方法。
如果处死狗的同时要采集其血液时,则在用硫喷妥钠轻度麻醉后,将狗固定在狗手术台上。分离颈动脉,插一根较粗的塑料管,放低狗头,打开动脉夹,使动脉血流入装有抗凝血的容器内,并不断摇晃,以防血液凝固。
第八节 转基因动物
1980年底Gordon等人首次将克隆的基因注入小鼠受精卵原核,然后移植于假孕的母鼠输卵管,培育出第1个转基因动物。这种将外源性基因用实验方法插入动物生殖细胞的


