电泳和Western转印的常见问题
2007-2-3 20:25:29 信息来源：Invitrogen Focus 第200410期
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表1 Common problems for electrophoresis and western bloting
| 问 题 |
可能原因 |
建议解决方法 |
| 推荐电压条件下电泳时间过长。 |
电泳缓冲液过稀。 |
配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。 |
| 推荐电压条件下电流过高，热量过大。 |
电泳缓冲液过稀。 |
配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。 |
| 推荐电压条件下电流过低或无电流。 |
接触不良。 |
在电泳前移除胶盒底部的封条；确认缓冲液没过加样孔；检查buffer core上导线连接。 |
| 蛋白带型条状（streak） |
上样过量。
样品中盐浓度过高。 |
降低蛋白上样量。通过透析或凝胶过滤降低样品中的盐浓度。 |
| 样品沉淀。 |
加大样品中SDS的浓度。 |
| 样品中的污染，如脂类或DNA 复合物。 |
离心或过滤样品以除去特定污染。 |
| 制胶不佳。 |
确保灌胶均匀，一次完成。 |
| 条带模糊。 |
蛋白样品部分变性。 |
完全变性蛋白。 |
| 蛋白样品部分还原。 |
确保加入足够量的DTT或β巯基乙醇。 |
| 电泳时间过长。 |
观察前面的指示剂染料，掌握恰当的电泳时间。 |
| 哑铃形条带或"微笑"条带。 |
上样体积过大导致不完全堆积。 |
使用恰当的上样体积。如果样品过稀，使用超滤浓缩。 |
| 电泳过程中电场不均匀。 |
如果蛋白浓度已知，上样时确保对称。 |
| 分离胶表面不平。 |
在制胶时使分离胶表面水平。 |
| 凝胶过期。 |
在指定的失效期前使用凝胶。 | |
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