| PMT检测器和测量的特性 |
| 来源:科端生物 点击数: |
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使用PMT作为光检测器进行化学发光检测,通常使用下列参数:背景信号(噪音),效率,灵敏度,动态范围,线性度,反应光谱和其他一些影响较小的因素。 背景 背景信号通常被分为两个部分,一个恒定(基线)部分和一个不同测读时都不相同的动态变化(噪音)部分。基线部分,通常都有一个固定的范围,可以通过从检测信号中扣除,因此对检测灵敏度基本没有影响。而变化的噪音部分,则是由最低信号检测水平的下部或上部的“灰色区域”造成的。此部分对灵敏度影响极大。如果测量值显著的超过此“灰色区域”,则其可以与背景值显著的区分开。 效率 反应信号(检测器输出信号)与输入信号(光强度)的比值。换句话说,也就是RLUs梯度与光强度梯度的比值。 试剂管(或孔)中化学反应所产生的100个光子,仪器大约会产生1…10个电子脉冲。确切的数值则会因为波长,管或板的材质,液体质量和其他条件而变化。 灵敏度 灵敏度是一个与背景统计成倒数相关(统计值越高灵敏度越低),与效率正相关的值。此参数多以光强度最低检测限度值表示。此值通常以仪器所能检测并清晰的与背景噪音区分的,某种发光底物的值来表示。 动态范围 此值为检测器所能定量的最高和最低信号间的比率。Berthold Detection Systems的Orion化学发光检测器的检测范围大约在50…20.000.000, 4*105 此值描述了伴随着输入信号改变(光强度)而输出信号(RLU)的改变。如果输出(RLU)信号与输入信号(光强度)以相同的比率改变,则检测器是线性的。例如,如果光强度加倍,输出信号(RLU)则会以某个比率同样加倍。 光子计数模式PMT的特性决定了其在高信号值时线性度必然有一定程度下降。主要原因如图所示,当相邻的两个脉冲过于接近时会产生“拖尾”的现象而合并成一个脉冲。这一影响因子在低值时可以忽略,但在非常高的信号值时会引起线性度的下降。
光谱反应 此参数用来描述PMT的效率与检测光的波长的比率。PMT阴极的效率——吸收的光子数目与发射的电子数目比——是指PMT所能“看见”的光的波长(或光谱波长)。波长或光谱波长是决定可见光颜色的参数。PMT的光谱反应曲线是由阴极所使用的材料所决定的。可以根据所检测样品的发光波长选择最优的PMT及其阴极所使用的材料。 几何学、光路设计 通常进行检测的光源都是液态的化学样品,或者是生物样品。这些样品会造成光的漫射,全方位的散布(360度,所有方向)。一般都是通过反射装置将大部分的发射光收集到检测器的方向。 考虑所有这些因素,将一个仪器校正到一个绝对的光单位是几乎不可能的。而且,由于以下的一些因素,在大多数情况下生物学分析不需要将仪器进行绝对的校正。 Ø 大多数所测量反应的发射光都是温度或时间不稳定的。 Ø 化学生物检测通常都是基于相对测量,通常都是由与对照样品的测量比较决定的。 Ø 化学及生物过程通常其重复性都是不精确的。 Ø 其他因素。
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