生物标本制作方法与技术的权威总结篇(二)

作者：football…    实验频道来源：中国生命科学论坛    点击数：    更新时间：2004-1-24

（二）分离液 1、肌细胞分离液 配方一 马克凯郎（Maccallum）液 取1份浓硝酸、2份甘油、3份水，混合后就得到马克凯郎液。 把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需1～3日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。 配方二 氢氧化钾溶液 取35克氢氧化钾，放在100毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。 把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中，浸泡15～30分钟后，肌细胞便可分离。 2、上皮细胞分离液 配方一 福尔马林-氯化钾溶液 称取58.44克氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到1000毫升，加入2毫升福尔马林。 这种溶液是很好的上皮细胞分离液，分离很迅速，而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块，放在此溶液里2小时即可分离，口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需3日左右。 配方二 水和氯醛溶液 称取5克水和氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到100毫升，就得到5%水合氯醛溶液。 从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块，投入以上溶液中，浸泡24～48小时。 3、神经细胞分离液 配方一 可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林-氯化钠溶液来分离神经细胞（见2）。 配方二 硼酸生理盐水溶液 在生理盐水溶液内加入一些硼酸，搅拌到不再溶解时为止，使成为饱和溶液。 把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。 4、植物茎细胞分离液 杰弗里氏（Jeffrey's）液 取等量的10%铬酸溶液和10%硝酸溶液混合，成铬酸-硝酸溶液。 这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里，加热煮沸，冷却后再加热煮沸。这样重复几次，到材料全部沉于水底后，投入分离液内，分离时间是24～48小时。 5、植物根尖细胞分离液 配方一 盐酸-酒精溶液 在1份95%酒精中慢慢的加入1份浓盐酸，即成盐酸-酒精溶液，装瓶密闭保存。 把植物根尖部位截下一小段，投入以上溶液中分离。 配方二 4%盐酸溶液 配制4%盐酸溶液。 截下植物根尖部位，投入盛有4%盐酸溶液的小烧杯内，在60摄氏度温水中隔水温热1～2分钟，使根尖软而不酥，这时分离效果最好。 6、植物纤维分离液 取10克氢氧化钠（或氢氧化钾），溶解在90毫升水里，制成10%氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，放在瓶里密闭保存。 把植物茎纵切成细条，剪成小段后，投入分离液内。 7、植物细胞质壁分离液 配方一 30%蔗糖溶液 取30克蔗糖，溶解在70毫升蒸馏水里，装瓶备用。 配方二 5%氯化钠溶液 取5克食盐，溶解在95毫升蒸馏水里，装瓶备用。 配方三 5%硝酸钾溶液 取5克硝酸钾，溶解在95毫升蒸馏水里，装瓶备用。 （三）生理盐水 配方一 各种动物需用的生理盐水 哺乳类 需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。 鸟类 需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。 两栖类 需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。 配方二 任氏（Ringer's）生理盐水 氯化钠 6.5克 碳酸氢钠 0.2克 氯化钾 0.14克 磷酸二氢钠 0.01克 氯化钙 0.12克 先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到980毫升。然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内，边滴、边搅拌，以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。 此溶液用于变温动物，尤其常用于两栖类。 配方三 乐氏（Locke's）生理盐水 氯化钠 9.0克 碳酸氢钠 0.1～0.3克 氯化钾 0.42克 氯化钙 0.24克 把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混合后加蒸馏水到980毫升。把氯化钙溶解在20毫升蒸馏水里，逐滴加入上述溶液中。 以上溶液用于恒温动物，尤其常用于哺乳类。 （四）培养液 1、人造海水 配方一 氯化钠( ) 24.72克 氯化钾（ ） 0.67克 氯化钙（ ） 1.36克 氯化镁（ ） 4.66克 硫酸镁（ ） 6.29克 碳酸氢钠（ ） 0.18克 蒸馏水 加到1升 把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中，再加入碳酸氢钠，最后用蒸馏水稀释到1000毫升。 配方二 氯化钠 45.0克 硫酸镁 0.1克 氯化镁 5.0克 氯化铁（1%溶液） 1滴 先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里，把此溶液逐滴加到上述溶液内，装瓶保存。 配方二 克诺普氏（Knop's）溶液 硝酸钾 1克 硫酸镁 1克 磷酸二氢钾 1克 硝酸钙 3克 先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙，用20毫升蒸馏水溶解，加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。 在以上溶液中加入蔗糖溶液（1～4%），能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。 3、植物无土培养液 配方 霍格伦德（Hoagland）和斯纳德（Snyder）液 硝酸钙 0.821克 硝酸钾 0.506克 磷酸二氢钾 0.136克 硫酸镁 0.120克 酒石酸铁 0.005克 把上述盐类溶解在少量蒸馏水里，然后稀释到1000毫升。 （五）培养基 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 氯化钠 0.5克 琼脂 1.5克 水 1000毫升 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。 配方四 根瘤菌培养基 葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克 碳酸钙 3克 硫酸镁（ ） 0.2克 酵母粉 0.4克 琼脂 20克 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基） 可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克 磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克 硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克 琼脂 2克 水 1000毫升 先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60克 琼脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市（Sabouraud's）培养基 蛋白胨 10克 琼脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100克 琼脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80粒 琼脂 5克 水 200毫升 取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯-蔗糖--琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 （六）染色剂 1、细菌染色剂 配方一 齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液 甲液 取石炭酸5克，溶解在95毫升蒸馏水中。 乙液 取0.3克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入10毫升95%酒精，继续淹没，使它溶解。 将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。 配方二 罗氏（Loeffler's）美蓝染液 甲液 取5克美蓝，溶于100毫升95%酒精中，制成美蓝-酒精饱和液。 乙液 取氢氧化钾0.01克（或1%氢氧化钾溶液1毫升），溶液也可用于放线菌染色，0.1%浓度可用于酵母菌染色。 配方三 革兰氏（Gram's）染液 用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。四种液体的配方如下： 甲液（结晶紫液） （1）结晶紫 2克 95%酒精 20毫升 （2）草酸铵 0.8克 蒸馏水 80毫升 使用钱江（1）、（2）液相混，静置48小时后使用。 乙液(碘液) 碘 1克 碘化钾 2克 蒸馏水 300毫升 将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300毫升。 丙液 95%酒精溶液 丁液（番红花红液） 2.5%番红花红酒精溶液 10毫升 蒸馏水 100毫升 2、细菌特殊染色剂 配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。 甲液 取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。 乙液 取番红花红0.5克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，集成番红花红复染液。 配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。 甲液 取结晶紫0.1克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。 乙液 取硫酸铜（ ）31.3克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。 配方三 鞭毛染液 甲液 饱和明矾溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升 20%丹宁酸溶液 2毫升 乙液 碱性品红 11克 95%酒精 100毫升 使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。 3、植物细胞壁染色剂 配方一 纤维素细胞壁染液（Ⅰ） 取固绿0.1克，溶于100毫升95%酒精中，即成0.1%固绿-酒精溶液。 该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。 配方二 纤维素细胞壁染液（Ⅱ） 氯化锌 20克 碘化钾 6.5克 碘 1.5克 蒸馏水加至100毫升 先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入6.5克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成碘-氯化锌溶液。 该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。 配方一 纤维素细胞壁染液（Ⅲ） 甲液 取1克碘和1.5克碘化钾，溶于100毫升蒸馏水中，即成1%碘液。 乙液 取7份硫酸和3份蒸馏水相混，即成66.5%硫酸溶液。 染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。 配方四 木质化细胞壁染液（Ⅰ） 硫酸化苯胺（或盐酸话本安） 1份 蒸馏水 70份 95%酒精 30份 硫酸 30份 将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。 配方五 木质化细胞壁染液（Ⅱ） 取间苯三酚4～5克，溶于100毫升95%酒精中，即成间苯三酚-酒精液。 先在材料上滴上1滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚-酒精液1滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。 处理 SSI 文件时出错