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神经在一次兴奋的过程中，其兴奋性也发生周期性变化，依次包括了绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个阶段。先给神经施加一个条件刺激引起兴奋，再在前一兴奋的不同时相给以一个测试性刺激，观察比较两个动作电位的间隔和幅值变化。
设置刺激间隔从20ms开始逐步减小，连续记录波形的变化。
图5：神经干兴奋不应期的测定
由图5所记录的曲线图像可见，当施加的两个刺激间隔在17ms的时候，前后引导出的两个动作电位幅度有差别，后一个动作电位明显比前者幅度低，说明这时施加的第二个刺激已经落在了第一个刺激的相对不应期内（实际上当刺激间隔为20ms时两个动作电位的幅度已经出现差异）；刺激间隔进一步缩短时，第一个动作电位无明显变化，而第二个动作电位随刺激间隔的缩短而幅值不断变小；当两个刺激的间隔缩短至2ms时，在曲线上已经观察不到第二个刺激的动作电位，说明此时第二个刺激刚好进入了第一个刺激的绝对不应期。
由曲线的分析可知，所用神经干标本的相对不应期应大于20ms，由于测量仪器所限未能测到其准确值（采集系统允许的刺激间隔最大即为20ms），而其绝对不应期约为2ms
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