CTAB法抽提核酸
2007-7-26 9:45:00 信息来源：来源网络
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CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 000g 离心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D , 于室温下放置15 min , 再用等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提1 次。④上清液加入缓冲液C 于室温下放置6h (或过夜) 。⑤12 000g 离心25 min , 吸去上清液, 用70 %乙醇洗沉淀两次, 加入150μL 缓冲液E , 存于4 ℃备用。
缓冲液C (50 mmol·L - 1 Tris - HCl , pH
8. 0 , 10 mmol·L - 1 EDTA , 0. 7mol·L - 1NaCl ,
1 %β- 巯基乙醇, 1 %CTA
。
缓冲液D (10 % CTAB , 0. 7mol·L - 1Na2
Cl) 。
缓冲液E (10 mmol·L - 1 Tris , 1 mmol·
L - 1EDTA. pH 8. 0 ) 。
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