细胞的生长和诱导
1. 诱导前一天晚上，细胞以适当的密度在含有500μmol/L L-组氨醇、3μg/ml嘌呤霉素和0.5μg/ml四环素-HCl的DMEM培养液中培养，使它们在收获时可以达到亚汇合态。
2. 第二天，用PBS洗细胞3次，每次都要轻轻旋转培养液。
3. 第三天洗涤后，立即加入含有500μmol/L L-组氨醇、3μg/ml嘌呤霉素但不含四环素的选择培养液。细胞在含或不含四环素的培养液中培养6～48 h。
收获细胞
4. 细胞生长适当的时间后，快速收获并放到冰浴的管中。
5. 每个克隆和对照都转移0.5×106细胞到离心管中，然后所有管子在4℃以3000 r/min（低或中速）离心5 min。
6. 加1 ml冰冷的磷酸盐缓冲液洗细胞。如步骤5洗细胞，轻轻吸掉上清，不要扰动细胞沉淀。
7. 细胞沉淀放在冰浴上，在离心管架上放的孔中轻快地旋动管子使沉淀变松，然后把它冻存在-70℃。
准备裂解物
8. 细胞沉淀用30μl蛋白样品缓冲液重悬，轻轻地吹打细胞，然后振荡管子。
9. 细胞在蛋白样品缓冲液中煮10 min。
10. 以最大速度离心2 min收集细胞碎片。
11. 在Tris-甘氨酸SDS-聚丙烯酰胺凝胶的每个冰道加10μl细胞裂解物。
