bioon.com 生物谷
生物谷RSS 生物谷手机WAP浏览支持
专业平台生物 | 产业 | 药学 | 医学 | 视频 | 实验 | 健康 | 图谱 | 考试 | 招聘 | 社区 | VIP | English
企业服务企业平台 | 产品大全 | 供求信息 | 名企展厅 | 会议会展 | 黄页 | 广告 | 服务 | 生意通 | E-solution
个人服务彩信 | 继续教育 | 博客 | 书库 | 资料 | 竞拍 | 求职 | 网址导航 | 下载 | 论坛 | 投稿 | TILS
您现在的位置: 生物谷 >> 实验 >> 分子生物学 >> 实验频道正文
rss

外源基因在真核细胞表达技术

30μg、体积最大可至40μl的质粒DNA。用吸管将DNA与细胞轻轻混匀。立刻继续进行第7步。

7.      立即将电转化池移至电极间放电,1~2min后,取出电转化池,水浴,立即进行下一步操作。

8.      用带有高压灭菌吸头的微量移液器将电穿孔的细胞转移至35 mm培养皿中。用等体积的培养基洗涤电转化池,洗液加入培养皿。培养皿置于含5%7% CO237℃孵箱。

9.      重复第68步,电转化所有DNA与细胞样品。记录下每一电转化池的实际脉冲时间以便于比较。

10.  如要获得稳定转化体,直接进行第11步。如果是瞬时表达,则于电穿孔2496 h后用下述方法之一检测细胞:

l        如果使用的是表达E.coli β-半乳糖苷酶的质粒DNA,检测细胞裂解液中酶活性。

l        如果使用绿色荧光蛋白表达载体,在450~490 nm光照下用显微镜检测细胞。

l        如果使用其它基因产物,则通过体内代谢标志物进行放射免疫、免疫印渍、免疫沉淀或测定细胞提取物的酶活性来分析新合成蛋白。

11.分离稳定转染体:用完全培养基培养48~72 h后,胰酶消化细胞,用适当的选择性培养基重铺细胞。每2~4天换液一次,持续2~3周,目的是去除死细胞残骸,并允许抗性细胞克隆生长。此后,克隆、繁殖独立克隆以用于检测[方法见Jakoby and Pastan 1979 Spector et al. 1998b (《细胞试验手册》的第86)]

上一页  [1] [2] [3] [4] 

实验频道录入:admin    责任编辑:admin 


评论】【收藏】【告诉好友】【打印】 【返回顶部】 【直达首页】 【进入论坛】 【转入博客】  

文章评论(评论内容只代表网友观点,与生物谷立场无关!

推荐产品
最新资讯
热点聚焦
推荐文章
关于我们 | 广告服务 | 联系方式 | 帮助信息 | 服务条款 | 法律声明 | 战略伙伴 | 友情链接 | 生意通 | 网站地图 | Bioon English
Copyright © 2001-2007 生物谷 bioon.com , All Rights Reserved. 版权所有
不良信息举报信箱:editor#bioon.com
网站备案:沪ICP备05022939号