问:转化效率太低,怎么办?
答:1. 检测一下DNA的纯度,如果可以的话,重新用乙醇纯化。
2. DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。
3. 不适当的培养基,重新配制培养基,并做对照转化。
4. 检测pGBT9对照载体的转化效率,放置于SD/–Trp平板上,转化效率应该在1 x 105 colonies/mg DNA以上。
问:杂交效率不高,该如何处理?
答:在杂交中,预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当你对诱饵菌株进行液体培养过夜时,应挑选大的,新鲜的克隆进行培养。经过离心和重悬后,使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x 109/ml。
一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性,同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。
