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免疫荧光技术

2007-3-21 21:50:28 信息来源:来源网络 
  •   免疫荧光技术
http://www.bioon.com 生 物 谷 网 站荧光抗体技术:

      ㈠抗原片的制作
      ㈡试验类型
      ㈢荧光显微镜检查
  ㈠抗原片的制作
  1 制作:
    *临床常见的标本有组织、细胞细菌三大类。

    *可采用涂片、印片或切片方式制备抗原片。
    *细胞采用涂片、印片或切片的方式制备抗原片。
    2 标本的固定:
    ⑴ 固定目的
    *防止细胞、细菌或切片从玻片上脱落。
    *去除组织中妨碍抗原抗体结合的类脂质。
    *易于保存。
    *(但CD、SIg的检测不进行固定,而采用活细胞染色)。
    ⑵   常用的固定方法:
      抗原           固定剂               固定方法
    蛋白质         95%乙醇           室温3~10min或4℃30min
        Ig类           甲醇                   同上
      酶类           丙酮                   同上
      激素           CCl4                           同上
      类脂质         10%福尔马林           室温3~10min
        多糖(细菌)         10%福尔马林       室温3~10min或4℃30min
                          丙酮、甲醇
      病毒           无水乙醇         室温5~10min或4℃30~60min
                            丙酮、CCl4             或-20 ℃60min以上

    ㈡试验类型
      1 直接法

2间接法

3补体结合法

其它免疫荧光技术
    流式细胞仪
    时间分辨免疫荧光技术
    荧光偏振免疫分析技术
    时间分辨荧光免疫测定
(time-resolved fluoresence immunoassay,TR-FIA)
基本原理是:利用具有双功能基团结构的螯合剂,将镧系元素标记到抗体(或抗原)上,经免疫反应形成复合物,由于镧系元素能发出荧光,故分离除去未结合的成分后,利用时间分辨荧光仪即可测定荧光强度,从而推测待测物含量。

    时间分辨荧光测定的特点:
    1 采用脉冲光源(每秒闪烁1000次以上的氙灯),
    照射样品后即暂短熄灭.
      2 以电子设备控制延缓时间,待非特异本底荧
    光衰退后,再测镧系荧光。
    3 镧元素具有较长的荧光寿命(105ns),延缓测量时
      间,能有效地消除非特异本底荧光(10ns)的干扰,
    4 镧系螯合物的激发光与荧光发射峰之间的波长差
      异(即较大的Stokes位移),有利于排除非特异性
      荧光干扰,提高检测特异性。镧系元素有Eu、Sm
        Tb、Nd 和Dy等,其中以Eu最为常用。
    5 测定技术类型有:竞争法、夹心法、间接法等。
  
    荧光偏振免疫分析技术(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)是利用荧光素经单一波长的偏振光照射后吸收光能,释放出相应的偏振荧光,荧光偏振程度与荧光分子大小成正比的关系而建立的免疫分析技术;技术类型主要采用竞争法。

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