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荧光抗体技术:
㈠抗原片的制作
㈡试验类型
㈢荧光显微镜检查
㈠抗原片的制作
1 制作:
*临床常见的标本有组织、细胞细菌三大类。
*可采用涂片、印片或切片方式制备抗原片。
*细胞采用涂片、印片或切片的方式制备抗原片。
2 标本的固定:
⑴ 固定目的
*防止细胞、细菌或切片从玻片上脱落。
*去除组织中妨碍抗原抗体结合的类脂质。
*易于保存。
*(但CD、SIg的检测不进行固定,而采用活细胞染色)。
⑵ 常用的固定方法:
抗原 固定剂 固定方法
蛋白质 95%乙醇 室温3~10min或4℃30min
Ig类 甲醇 同上
酶类 丙酮 同上
激素 CCl4 同上
类脂质 10%福尔马林 室温3~10min
多糖(细菌) 10%福尔马林 室温3~10min或4℃30min
丙酮、甲醇
病毒 无水乙醇 室温5~10min或4℃30~60min
丙酮、CCl4 或-20 ℃60min以上
㈡试验类型
1 直接法
2间接法
3补体结合法
其它免疫荧光技术
流式细胞仪
时间分辨免疫荧光技术
荧光偏振免疫分析技术
时间分辨荧光免疫测定
(time-resolved fluoresence immunoassay,TR-FIA)
基本原理是:利用具有双功能基团结构的螯合剂,将镧系元素标记到抗体(或抗原)上,经免疫反应形成复合物,由于镧系元素能发出荧光,故分离除去未结合的成分后,利用时间分辨荧光仪即可测定荧光强度,从而推测待测物含量。
时间分辨荧光测定的特点:
1 采用脉冲光源(每秒闪烁1000次以上的氙灯),
照射样品后即暂短熄灭.
2 以电子设备控制延缓时间,待非特异本底荧
光衰退后,再测镧系荧光。
3 镧元素具有较长的荧光寿命(105ns),延缓测量时
间,能有效地消除非特异本底荧光(10ns)的干扰,
4 镧系螯合物的激发光与荧光发射峰之间的波长差
异(即较大的Stokes位移),有利于排除非特异性
荧光干扰,提高检测特异性。镧系元素有Eu、Sm
Tb、Nd 和Dy等,其中以Eu最为常用。
5 测定技术类型有:竞争法、夹心法、间接法等。
荧光偏振免疫分析技术(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)是利用荧光素经单一波长的偏振光照射后吸收光能,释放出相应的偏振荧光,荧光偏振程度与荧光分子大小成正比的关系而建立的免疫分析技术;技术类型主要采用竞争法。
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