2．4℃ 500～1000r/min离心弃去染液。

3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。

4．400目的筛网过滤1次。

5．流式细胞仪分析。

2）Annexin V/PI双染色法

1．细胞收集：悬浮细胞直接收集10ml的离心管中，而帖壁细胞先用滴管轻轻吹打，调亡细胞一经吹打可能脱壁，收集到10ml的离心管中，没脱壁的细胞用0.02％的EDTA消化使之脱壁，每样本细胞数为（1～5）×10⁶，500～1000r/min离心5min弃去培养液。

2．用孵育缓冲液洗1次，500～1000r/min离心5min。

3．用100μl的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10～15min。

4．500～1000r/min离心5min沉淀细胞，孵育缓冲液洗1次。

5．加入荧光溶液4℃下孵育20min，避光并不时振动。

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