细胞调亡的流式细胞仪检测技术

一、固定细胞的染色方法

1）PI单染色法

方法一

1．收集细胞（1～5）×10⁶个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

2．3ml PBS洗一次。

3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。

4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。

5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。

6．用1ml PI染液，4℃避光30min。

7．流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光，可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。

方法二

1．收集细胞（1×10⁶个），500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

2．1ml PBS/FCS洗一次。

3．500～1000r/min离心5min去PBS/FCS，加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液，轻轻混匀，在4℃下固定

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