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细胞凋亡检测:生化特征的检测方法

观测

1.取一定量的标记DNA稀释后在1.8%琼脂糖凝胶上点样,50V电泳约2h

2.电泳后的凝胶置滤纸上烘干,进行放射自显影。

3.32P标记DNA电泳干凝胶进行同位素液闪测定,计算放射活性。

二、原位末端标记技术

 1DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移(ISNT

1.切片常规脱蜡,梯度乙醇复水化。

2.将切片组织浸入2×SSC液中,80℃,20min,然后蒸馏水冲尽。

3.0.5%胃蛋白酶(pH2.037℃消化020minPBS洗尽。

4.用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A5min。缓冲液A50mmol/L Tris-HCl, 5mmol/L MgCl2, 10mmol/L β-巯基乙醇,0.005BSApH7.5

5.弃去缓冲液A,滴加标记液约50μl25℃温育1h。标记反应液:0.005mmol/L dNTP, 0.005mol/L biotin-16-dUTP, 25U/ml Klenow大片段。

6.PBS漂洗2次,各3min

7.内源酶阻断剂阻断15min

8.PBS2次,各3min

9.滴加HRP-avidin

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