1.取一定量的标记DNA稀释后在1.8%琼脂糖凝胶上点样,50V电泳约2h。
2.电泳后的凝胶置滤纸上烘干,进行放射自显影。
3.含32P标记DNA电泳干凝胶进行同位素液闪测定,计算放射活性。
二、原位末端标记技术
1)DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移(ISNT)
1.切片常规脱蜡,梯度乙醇复水化。
2.将切片组织浸入2×SSC液中,80℃,20min,然后蒸馏水冲尽。
3.0.5%胃蛋白酶(pH2.0)37℃消化0~20min,PBS洗尽。
4.用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A,5min。缓冲液A:50mmol/L Tris-HCl, 5mmol/L MgCl2, 10mmol/L β-巯基乙醇,0.005%BSA,pH7.5。
5.弃去缓冲液A,滴加标记液约50μl,25℃温育1h。标记反应液:0.005mmol/L dNTP, 0.005mol/L biotin-16-dUTP, 25U/ml Klenow大片段。
6.PBS漂洗2次,各3min。
7.内源酶阻断剂阻断15min。
8.PBS洗2次,各3min。
9.滴加HRP-avidin


