8.同法用等体积酚:氯仿:异戊醇抽提,乙醇沉淀,真空抽干。
9.溶液20μl的TE缓冲液中,-20℃保存备用。DNA含量测定:用260nm波长紫外分光光度计:吸光单位为20时约为1mg/ml DNA。
DNA 5’末端脱磷酸
1.取纯化的细胞DNA 10μg,然后加入:10×CIP 2μl(1U),双蒸水加至50μl。
2.37℃水浴2h。
3.90℃水浴5min以灭活CIP。
4.用等体积酚:氯仿:异戊醇抽提,乙醇沉淀,真空抽干。
DNA 5’末端32P标记
1.将脱磷酸样品DNA置冰浴上,再加双蒸水10μl,10×缓冲液2μl,T4多核苷酸激酶10U,32P-ATP 740kBq(20μCi),双蒸水加至20μl。
2.混合后,37℃水浴60min。
3.加入1μl的0.5mol/L EDTA,90℃灭活5min。


