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细胞凋亡检测:生化特征的检测方法

0.5μCiKlenow聚合酶5U,双蒸水加至20μl

3.混匀后稍加离心,室温反应30min

4.1μl 0.5mol EDTA终止反应。

5.常规酚/氯仿/异戊醇抽提1次,无水乙醇沉淀DNA,真空抽干。

6.溶于20μlTE缓冲液中。

7.取标记DNA1.8%琼脂糖凝胶上点样,50V电泳约2h

8.电泳后的凝集置滤纸上烘干,进行放射自显影。

 

5’末端32P标记法

细胞DNA的提取

1.细胞悬液离心后,沉淀加消化缓冲液0.5ml50 35h,或37℃过夜。

2.用等体积的酚:氯仿:异戊醇抽提细胞裂解液。

3.将水相转移至新的试管,加入150mmol/L乙酸钠和10mmol/L氯化镁。

4.加入2倍体积的预冷无水乙醇,置液氮5min或-20 12h

5.12 000r/min离心沉淀DNA70%乙醇洗1次后,真空抽干。

6.溶于20μlTE缓冲液中。

7.

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