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细胞凋亡检测:生化特征的检测方法

根据调亡的生化特征的检测方法

一、琼脂糖凝胶电泳

1)常规的琼脂糖凝胶电泳

方法一:

1.收集细胞(5×1061000r/min,离心5min,去上清。

2.PBS洗一次,1000r/min,离心5min,去上清。

3.加细胞核裂解液500μl重悬细胞,50℃水浴,35h,不时振摇或37℃过夜。

4.0.5ml平衡酚抽提,上下颠倒几次混匀,6000r/min,离心5min

5.上清移至另一Ep管,加0.5ml氯仿:异戊醇抽提,上下颠倒几次混匀,6000r/min,离心5min

6.上清移至另一Ep管,加50μl3mol/L乙酸钠和2ml预冷无水乙醇,上下颠倒几次混匀,可见絮状白色沉淀物。

7.置液氮510min12 000r/min离心10min沉淀DNA,去上清,真空抽干或风扇下吹干残存液体。

8.50100μl TE缓冲液,另加5μl RNase37℃水浴30min

9.20μl加上样缓冲液25μl1

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