酵母免疫荧光

1）细胞制备

1．培养5ml酵母至对数生长早期（10⁶～10⁷细胞/ml）。

2．直接加1/10体积的甲醛到培养基里固定细胞（加入的甲醛终浓度为3.7％，标准母液是37％）。

3．细胞在甲醛中培养至少1小时。

4．离心收集细胞，用0.1mol/L磷酸钾（pH7.5）洗一次。

5．把细胞悬浮在1ml的50mg/ml消解酶100T或50单位/ml的溶细胞酶[溶于含有2ml/ml 6-巯基乙醇的0.1mol/L的磷酸钾溶液中]。

6．置30℃培养30分钟，用相差显微镜检查原生质的生成率。细胞应呈黑色或半透明灰色，亮细胞（折射体）属于没有充分被消化的。菌蜕属消化过夜。

7．离心收集细胞，悬浮在1ml的PBS中。

2）染色

1．取10ml的1mg/ml聚赖氨酸，放到用特氟隆封闭的（Teflonmasked slides）载玻片（10孔载玻片）上的每个孔，再用蒸馏水洗载玻片，干燥。

2．放10ml固化细胞到每个孔中，几分钟后，用PBS抽洗3次。用显微镜检测载玻片确保呈合适的密度而不聚集。

3．该步骤可任选（本实验不需要使用抗体，但建议使用）：把载玻片浸泡在冷甲醇（－20℃）6分钟后，然后放到冷丙酮（－20℃）30秒，该处生理产生扁平细胞，有助于细胞骨架的观察。对于一些抗体-抗原结合物，需要这些步骤重新活化，用PBS重新润湿玻孔。

4．

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