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酵母遗传学方法7:随机孢子分析

随机孢子分析

1)孢子形成

1.挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在YPD平板上,尽可能把细胞涂薄一些,在30℃下培养1216小时,超过16小时将明显降低孢子的形成率。

2.上午,用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞,转到含有2.5ml产孢培养基试管中,在25℃下旋转振荡培养。

3.用光学显微镜检测孢子形成情况。要使5%以上的细胞形成孢子需花210天。

 

2)随机孢子

4.1ml形成孢子的培养物转到15ml的锥形聚苯乙烯离心管,用医用离心机离心5分钟沉淀细胞。

5.彻底除去上清液,把细胞悬浮在0.2ml无菌水和5μl β-葡糖苷酸酶(约500个单位)。

6.30℃条件下旋转振荡培养1小时。

7.0.1ml(约0.15克)灭菌的0.5mm玻珠,在30℃条件下旋转振荡培养1小时。

8.1ml无菌水。

9.振荡12分钟,用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。

10.  4ml无菌水。

11.  用无菌水做101103稀释度,在含有60μg/ml刀豆氨酸的SCarg平板上涂200μl

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