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酵母遗传学方法5:酵母β-半乳糖苷酶的测定

H2O

0.75 g   KCl

0.246 g  MgSO47H2O

2.7 ml   β-巯基乙醇

用蒸馏水定容至1

pH7.0,保存于4

b.      28℃水浴中将混合物保温5分钟。

c.       加入0.2ml临硝基苯-β-D半乳吡喃糖苷(ONPG)母液,开始反应,注意准确时间,在28℃下保温至混合物产生淡黄色。

d.      加入0.5ml碳酸钠母液终止反应,注意准确记录反应终止的时间,在420nm波长下测定光密度。

9.采用Bradford1976)染料结合测定法测定抽提物中的蛋白质浓度。

a.       用蒸馏水将Bradford试剂稀释5倍。用Whatman540号滤纸过滤稀释试剂。

b.      1020μl抽提物到1ml稀释试剂中,并混合。在595nm波长下测定形成的蓝色溶液。用一次性塑料比色杯以防止形成蓝膜影响测定结果。

c.       BSA溶解于裂解缓冲液中,选用几个不同稀释度(0.11mg/ml)制成标准曲线。

10.  根据下面公式计算抽提物的特异活性:

                          OD420×1.7            

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