0.75 g KCl
0.246 g MgSO4•7H2O
2.7 ml β-巯基乙醇
用蒸馏水定容至1升
调pH至7.0,保存于4℃
b. 在28℃水浴中将混合物保温5分钟。
c. 加入0.2ml临硝基苯-β-D半乳吡喃糖苷(ONPG)母液,开始反应,注意准确时间,在28℃下保温至混合物产生淡黄色。
d. 加入0.5ml碳酸钠母液终止反应,注意准确记录反应终止的时间,在420nm波长下测定光密度。
9.采用Bradford(1976)染料结合测定法测定抽提物中的蛋白质浓度。
a. 用蒸馏水将Bradford试剂稀释5倍。用Whatman540号滤纸过滤稀释试剂。
b. 加10~20μl抽提物到1ml稀释试剂中,并混合。在595nm波长下测定形成的蓝色溶液。用一次性塑料比色杯以防止形成蓝膜影响测定结果。
c. 将BSA溶解于裂解缓冲液中,选用几个不同稀释度(0.1~1mg/ml)制成标准曲线。
10. 根据下面公式计算抽提物的特异活性:
OD420×1.7


