酵母RNA的分离

1）总酵母RNA的分离

1．在每毫升培养物中加入50μg环乙酰亚胺，在30℃下振荡15分钟。此步亦可省略，但是有人认为环乙酰亚胺可防止mRNA凝集在多核糖体上。

2．迅速冷冻收集细胞，在大离心管中加入约一半体积的碎冰，将培养物倒入，振荡，在4℃下以5000r/min离心5分钟。

3．加入11g玻珠于30ml离心管中，以Corex玻璃离心管为最佳，不过塑料离心管也能使用。

4．加入3ml已用LETS缓冲液平衡的苯酚到玻珠中。

LETS缓冲液：

0.1 mol/L 氯化锂

0.01  mol/L Na₂EDTA

0.01  mol/L Tris-HCl (pH7.4)

0.2% SDS

0.1% 二乙基焦碳酸（可任选）

5．用2.5ml冰预冷的LETS缓冲液悬浮细胞，并将其加入到上述玻珠苯酚管中。为了使细胞破碎的最好，液面应刚好高于玻珠表面。

6．高速振荡30秒后，在冰上置30秒，交替进行3分钟，用相差显微镜检测细胞破碎情况，破碎的细胞呈现无折射的空细胞。

7．当至少90%细胞破碎后，用5ml冰预冷的LETS缓冲液，轻微振荡，用Sorvall SS－34转头以8000r/min离心5分钟，使溶液分相。离心后，酚层和蛋白质界面应刚好低于玻珠表面，移出水相而不会触动界面。

8．将水相转到一个干净离心管，用5ml苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1）抽提2次，避免触动界面。用氯仿抽提一次。

9．加入1/10

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