DNA（基因）检测－Southern Blot

DNA吸印转移

1．室温下将电泳后的琼脂糖凝胶浸入500ml溶液A中，摇动30分钟后换500ml新鲜溶液A再摇30分钟，使DNA双链碱变性。

溶液A：

5M NaCl     300.0ml

10M NaOH    50.0ml

H₂O         650.0ml

2．为使凝胶重新回到中性，换入溶液B中重复上述1过程。

溶液B：

10M 乙酸铵      200.0ml

10M NaOH         4.0ml

H₂O            1796.1ml

硝酸纤维素薄膜（NC膜）

3．料盒或盘中放一玻璃板支架，倒入10×SSC，将Whatman 3MM滤纸放在玻璃板上，两头浸在液体中，用玻棒赶除气泡。

4．心地将琼脂糖凝胶翻过（扣过来）滑到纸上，放平、赶除气泡。

5．将预先浸于溶液B中的NC膜，平铺在胶上，用玻棒赶除气泡。

6．在膜上放置两层预先以10×SSC浸湿的Whatman 3MM滤纸。

7．再放6张干燥吸水纸及4堆3cm厚的折叠吸水纸。

8．在纸上覆盖玻璃平板，板上可置约250g重物，下部缓冲液根据虹吸原理能被吸上来，凝胶上的单链DNA即可被吸出并转移到NC膜上。转移速度取决于DNA片段的大小。<1kb的片段在0.7％的胶中2小时即可转出，而15kb

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