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细胞生物基本方法:特殊培养法

特殊培养法

1)二倍体细胞培养

二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:

1.      吸除旧培养液注入另瓶中。

2.      用温BSS冲洗1次。

3.      0.25%温胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。

4.      待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按21新旧混合)。

5.      轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。

6.      按一分为二比例接种培养。

 

2)  支持物培养法

加支持物培养法与一般培养法相同,只是在培养前需在培养瓶中加入已经消毒的支持物。

1.      支持物制备:如用特氟隆薄膜,无菌条件下启封,用剪刀按需要剪成各种不同大小的块,于培养接种细胞前,先置入培养容器中即可;通常多用盖玻片做支持物,用前先要把盖片用玻璃刀切成一定形态,以便装入培养瓶中,然后按如下顺序处理:自来水浸泡24小时—96%酒精3060 min—蒸馏水浸泡3060 min—用干净软布擦拭干净装入培养皿中高压或干热灭菌备用。

2.      培养法:初代消化培养、初代组织块培养、传代培养等皆可应用加支持物培养法。接种细胞后,可在任何时间取出支持物,做各种观察或实验。

 

3)  细胞分离(克隆)培养

多孔塑料培养板单细胞克隆法:

1.      消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。

2.      低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,最适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。

3.      接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在最短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2

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