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1 药品与试剂 盐酸肾上腺素(福州嘉华制药股份有限公司) , 氯胺酮(江苏恒瑞医药股份有限公司) , 内皮素-1 (ET -1) 浓度试剂盒(解放军总医院科技开发中心放免研究所)。
2 仪器 HU -12A 透射电镜(***日立电子公司) , FJ-2011 型r免疫计数器(西安国营262 厂)。
3 实验方法
3. 1 动物分组 健康成年SD 大鼠44 只, 雌雄不拘, 体重300±20 g, 由浙江省实验动物中心提供。适应性饲养1 周, 随机分成2 组: 对照组6 只; 血管内皮损伤模型制作组38 只, 其中单纯模型制作组(模型组) 10 只, 另28 只(治疗组) 在模型制作过程中进行高压氧或高压空气干预。
3. 2 模型制作 用生理盐水将1 m g/m l 的盐酸肾上腺素稀释115 倍, 于每天的8: 00、12: 00、16: 00于相同部位皮下注射33.3 Lg (0.05 m l)/100 g, 连续5 天。对照组在同一时间、同一部位注射等量的生理盐水。
3. 3 标本采集 两组动物均于模型制作第6 天晨8: 00, 用氯胺酮按2 m g/100 g (体重) 肌肉注射麻醉, 开胸取降主动脉约1～ 2 mm 3 留作电镜标本, 自心脏取血1.5 m l 测定血浆中ET 21 浓度。
3. 4 电镜观察 SD 大鼠降主动脉标本经3% 戊二醛-1.5% 多聚甲醛固定4 h 以上(4 ℃) , 磷酸缓冲液(PBS) 漂洗后, 1% 锇酸后固定2 h (4 ℃) , 逐级乙醇2丙酮脱水, 环氧树脂618 浸透, 包埋, 超薄切片经枸橼酸铅、醋酸铀双染色各10 m in, 用HU -12A 透射电镜观察降主动脉内皮细胞结构等变化。
3. 5 血浆ET -1 浓度测定 放射免疫分析法。
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