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微球的致敏方式

物理吸附法

1.PLP与少量所要致敏的抗原或抗体按一定比例在适当体积、pH值、离子强度下,孵育一段时间,中和PLP表面电荷,这时可发生絮状凝集。

2.继续加入抗原或抗体,它们可与PLP不断结合,致敏乳胶的敏感性和稳定性逐渐提高,当抗原和抗体过量时,致敏的PLP表面大多结合有双层抗原或抗体分子,内部分子结合牢固,外层分子经反复冲洗容易失去,稳定性则降低。

化学交联法

利用化学乳胶表面的羧基、羟基或酰胺基团通过化学交联剂(如戊二醛、碳化二亚胺、溴化氢等)与抗原或抗体上的氨基基团共价联接使微球致敏的一种方法。常见CPLP

生物素-亲和素桥联接法

1.乳胶与亲和素结合:PLP通过物理吸附法可直接与亲和素在孵育过程中结合,CPLP经碳化二亚胺(EDC)活化后,其上的羧基可与亲和素上的氨基以酰胺键结合。

2.生物素与配体结合:活化生物素(如短链的羟基琥珀酰亚胺脂等)的羧基基团通过酰胺键与抗原(或抗体)的氨基基团结合。

3.联接乳胶与配体:以适当比例混合上述分别标有生物素和亲和素的乳胶微粒和配体,孵育一段时间后,加入少量游离生物素,最后用缓冲液和封闭缓冲液洗涤数次,稀释成一定浓度备用。

多肽桥联接法

将一带正电荷的多肽(如多聚赖氨酸、多聚精氨酸)通过物理吸附法或化学交联法联接到微球上,某些带负电荷的配体与之结合达到微球致敏目的,其中多肽分子量一般<500Kda,最好在100Kda以下。

直接组合法

该法将微球制备和致敏过程同步进行,以氟碳油微球为例,将氟碳油和配体以及起稳定作用的惰性蛋白质按一定比例混合进行乳化,微球形成后配体已直接组合在微球的表层。

强迫吸附法

当配体与微球混合后,用一种合适的沉淀剂迫使配体沉淀在微球表面而致敏。常用含0.5%醋酸钠的95%乙醇液为蛋白质或含羧基化合物配体作沉淀剂。

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