神经生长因子（NGF）的检测方法：细胞分化

PC12细胞分化实验

1．PC12细胞的培养：PC12细胞培养于36℃ 7.5％ CO₂饱和水汽二氧化碳培养箱中，每2天更换2/3培养液，待细胞接近于汇合时，用含1mmol/L EGTA的上述培养液培养细胞6小时以上或过夜，用RPMI-1640/水（1：1）洗涤细胞3次，吹打分离单个细胞，1：3或1：4分瓶继续培养。PC12细胞的倍增时间约2.5～4天。

2．检测NGF活性：

1）用上述培养液将PC12细胞配成10⁶/ml。每个35mm培养皿中加入0.5ml细胞悬液和系列稀释的NGF待测样品或标准品。对照培养皿中不加NGF。36℃ 7.5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养20～24小时。

2）在相差显微镜下观察PC12细胞。细胞成簇生长，计数100个细胞簇，其中细胞有纤维状突起的细胞簇为阳性细胞簇数。以分化细胞簇数对样品稀释度作图，绘制剂量-反应曲线，计算样品中NGF的含量。