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IL-7的研究方法

IL7的研究方法

1IL-7的检测方法

1.Clone 2b细胞的培养:培养clone 2b细胞的培养液是含有5%小牛血清,50μmol/L 2-巯基乙醇,2mmol/L谷氨酰胺和1000U/ml重组人和小鼠IL-7IMDM培养液。细胞以2×104/ml的浓度培养于直立的培养瓶中,在37℃含7.5 CO25 O2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养3天,当细胞生长到约1×1052×105/ml时分瓶继续培养。

2.clone 2b细胞检测IL-7

1)取生长23天的clone 2b细胞。用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次,每次离心250×g 10分钟,去上清液。用1%台盼蓝染液鉴定细胞活力,再用含5%小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞稀释到1.25×105/ml。取96细胞培养板,每孔加细胞悬液50μl

2)倍比稀释IL-7的标准品和待检样品,标准品从200pg/ml稀释到1pg/ml,共8个稀释度。每个稀释度3个复孔,每孔加50μl稀释液。阴性对照孔加50μl培养液。

3)37℃含7.5CO25

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