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IL-6的研究方法

含量的测定

ELISA方法

 

3IL-6的纯化

1.用无血清的RPMI-1640培养液将生长良好的TCL-Nal细胞配成1×106/ml,在旋转培养瓶中培养2天。收集上清液,离心100 000×g 120分钟。超滤浓缩上清液1020倍。

2.PBS平衡Ultrogel AcA34层析柱(2.5×90cm),上样后用PBS洗脱。收集活性组份,对25mmol/L pH6.3哌嗪-HCl水溶液(透析液)透析。

3.用透析液平衡Mono P层析柱,在FPLC上层析,上样后用Polybuffer-74 pH4.5Pharmacia公司)溶液洗脱。收集活性组份,加入三氟醋酸(TFA)到终浓度0.1%。

4.上样于Synchropak RP-P C18反向HPLC层析柱(4.1×250nm),用0.1 TFA平衡和洗涤。用含0%→50%乙腈梯度的0.1 TFA溶液线性梯度洗脱25分钟,再用含50%→70%乙腈梯度的0.1 TFA溶液线性梯度洗脱30分钟。收集活性组份。

 

4IL-6受体的研究方法

受体竞争结合实验

1.用氯胺T法标记IL-6:取5μl人重组IL-60.5μg),加入250

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