IL-6的研究方法
1)用B9细胞株检测IL-6
1.取培养两天的B9细胞(对数生长期),用RPMI-1640培养液洗两次,每次离心250×g 10分钟,洗去培养液中的IL-6。用1%台盼蓝鉴定细胞活力,再用含5%小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞稀释到5×104/ml。
2.取96孔细胞培养液,每孔加细胞悬液100μl。用细胞培养液稀释IL-6的标准品和待检样品,标准品从100pg/ml稀释到0.1pg/ml(共10个稀释度),待检样品10倍稀释或2倍稀释,每个稀释度3个复孔,每孔加100μl稀释样品。阴性对照孔加100μl培养液。
3.在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养72小时。
4.向每孔中加10μl MTT(用PBS配成5mg/ml,滤过除菌,避光保存),继续培养4~5小时。每孔加25μl酸化SDS,充分混匀。放置室温暗处1小时,溶解结晶产物。在酶标计数仪中计数570nm处的光吸收值。
5.用光吸收值对标准IL-6的浓度作图,根据标准曲线判定样品的相对浓度。
2)检测IL-6刺激B细胞分化和产生Ig的活性
检测IL-6诱导


