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IL-5的研究方法

IL5的研究方法

1)用BCL-1细胞检测IL-5

1.BCL-1细胞的获得和保存

1)从液氮中取出冻存的BCL-1细胞,立即放入37℃水浴中熔化细胞。将约107BCL-1细胞注射入BALB/c小鼠的腹腔。大约四周左右,小鼠脾脏中即会出现肿瘤。此后一周到小鼠死亡之间的任何时候都可取脾分离脾细胞。

2)外科方法无菌摘取小鼠脾脏。用注射器芯压迫脾脏通过200目的钢丝网即可得到单个脾细胞悬液。

3)用抗小鼠T细胞的单克隆抗体加补体处理小鼠脾细胞,去除其中的T细胞,然后用RPMI-1640培养液彻底洗涤剩余的小鼠脾脏BCL-1细胞。

4)用含10%甘油(或二甲基亚砜)和40%小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞配制到5×107/ml,每个安剖瓶1ml。置4 1小时,202小时,冻存细胞于液氮中。

2.BCL-1细胞检测IL-5

1)取新鲜分离的小鼠脾脏BLC-1细胞或迅速在37℃水浴中复苏冻存于液氮中的细胞。用RPMI-1640培养液洗涤两次,每次离心250×g 10分钟。

2)1%台盼蓝染色鉴定细胞活力(应大于85%)。再用含5%小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞稀释到2×105/ml。取96细胞培养板,每孔加细胞悬液50μl

3)倍比稀释IL-5的标准品和待检样品,每个样品至少8个稀释度,每个稀释度3个复孔,每孔加50μl稀释液。阴性对照孔加

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