 作者简介
朱雄超 副主任医师，现供职于浙江大学医学院附属第一医院，从事神经内科工作；１９８８年毕业于北京医科大学临床医学系，主要研究方向为脑血管疾病，以第一第二作者发表论文１２篇，主持及参与科研项目３项。
摘要
目的：观察蛋白Ｃ在鼠糖尿病模型中的改变及通心络胶囊干预的影响。方法：将ＳＤ大鼠随机分为两组，一组经链尿佐菌素诱发的糖尿病模型（ＤＭ）组，另一组为血糖正常对照组（Ｃ），两组均再随机分为ＤＭ１组、ＤＭ２组、Ｃ１组、Ｃ２组，其中ＤＭ２、Ｃ２组给予通心络治疗５周。治疗前后称体重、监测血糖，采用发色底物法测定血浆蛋白Ｃ活性。结果：ＤＭ１、ＤＭ２、Ｃ１、Ｃ２组血浆蛋白Ｃ活性分别为（４．９５±１．２４）％，（６．４８±２．０２）％，（３．６１±１．１２）％，（５．０８±１．４３）％。ＤＭ２组高于ＤＭ１组，ＤＭ１组高于Ｃ１组，Ｃ２组高于Ｃ１组，差别有显著性意义Ｐ＜Ｏ．０５。结论：蛋白Ｃ活性在鼠糖尿病早期就出现增强，蛋白Ｃ参与糖尿病性心脑血管病变的发生和发展过程。通心络能使正常鼠蛋白Ｃ活性增强，也能使蛋白Ｃ活性本已增强的糖尿病鼠的蛋白Ｃ活性进一步增强，可能对糖尿病致心脑血管疾病有一定治疗和预防作用。
研究
糖尿病患者往往伴随出凝血系统功能异常，并与糖尿病心、脑血管病变等慢性并发症发生发展密切相关，而蛋白Ｃ作为一个重要的抗凝因子，其在糖尿病时存在明显的合成分泌异常。我们利用鼠糖尿病模型观察糖尿病早期是否存在蛋白Ｃ改变，同时观察通心络胶囊治疗对其的干预作用。
对象和方法
对象：ＳＤ大鼠５０只，清洁级动物，雌雄各半，体重２０１～２３７ ｇ ２１８．０±１０．３１ ｇ。由浙江大学医学院实验动物中心提供实验动物和标准实验室。
方法：
１．糖尿病模型建立 用天平称取链尿佐菌素４５０ ｍｇ，加入由柠檬酸、柠檬酸钠配成ｐＨ值为４．２的缓冲液３７．５ ｍｌ，摇匀放置冰浴中。随机抽取ＳＤ大鼠３０只雌雄各半，按６０ ｍｇ／ｋｇ即０．５ ｍｌ／１００ ｇ在大鼠腹腔注射链尿佐菌素，在４５分钟内注射完毕。链尿佐菌素注射后１０小时内给予大鼠喂饲１０％葡萄糖，以防止低血糖。（２４～７２）小时分别每天监测一次血糖，连续两次血糖＞２５０ ｍｇ／ｄｌ视为糖尿病模型造模成功。以后根据血糖情况隔天腹部皮下注射中效胰岛素诺和灵Ｎ （２～４） Ｕ，使血糖保持在２５０ ｍｇ左右。结果造模成功２５只，饲养中于第三、五周共死亡２只，最后入组存活２３只，其中雌鼠１２只、雄鼠１１只。随机弃用雌鼠１只，以保持性别平衡。余２０只大鼠同批给予腹腔注射由柠檬酸、柠檬酸钠配成的ｐＨ值为４．２的缓冲液，７２小时后测定血糖均在正常范围。
２． 分组 第一组糖尿病模型１组（ＤＭ１）：随机抽取糖尿病模型鼠１２只雌雄各半，生理盐水灌胃１次／天，共５周；第二组糖尿病模型２组（ＤＭ２）：剩余糖尿病模型鼠１０只雌雄各半，通心络胶囊灌胃１次／天，１粒／次，共５周；第三组：正常血糖对照１组（Ｃ１）：随机抽取未造模ＳＤ大鼠１０只雌雄各半，生理盐水灌胃１次／天，共５周；第四组：正常血糖对照２组（Ｃ２）：剩余未造模ＳＤ大鼠１０只雌雄各半，通心络胶囊灌胃同第二组。实验开始分别测定四组ＳＤ大鼠的体重，１～４组ＳＤ大鼠体重分别为（２１６．３±９．５）ｇ、（２１９．６±１４．０）ｇ、（２１４．４±７．２）ｇ、（２２２．１±９．４）ｇ，差异无显著性Ｐ＞０．０５。治疗前后分别测定血糖，血糖测定用Ｓｕｒｅｓｔｅｐ血糖仪 由强生有限公司生产 测定。通心络胶囊由石家庄以岭药业股份有限公司提供。
３． 采血 鼠喂养４周后于心脏采血１．５ ｍｌ加入０．３ ｍｌ（０．１０９ ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸钠，采用常温离心机５０００转／分，离心５分钟，取血浆，放置－７０℃冰箱中保存待测。
４． 血浆蛋白 Ｃ测定 试剂盒由上海太阳生物技术公司提供，严格按说明书的步骤，采用发色底物法测定血浆蛋白Ｃ活性以下简称ＡＰＣ。
５． 统计学处理 各组数据均用均数±标准差表示，组间均数比较利用ＳＰＳＳ１０．０版进行方差分析（ＡＮＯＶＡ）及ｑ检验（Ｓ－Ｎ－Ｋ）。
结果
各组治疗前后血糖以及ＡＰＣ见表１。糖尿病组的血糖始终高于正常水平，而正常组血糖则始终在正常范围；ＡＰＣ则ＤＭ２组高于ＤＭ１、Ｃ１、Ｃ２组；ＤＭ１组高于ＣＩ组；Ｃ２组高于Ｃ１组，差别有显著性意义Ｐ＜Ｏ．０５，见表２。
| 表1 各组APC（单位为%） |
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| 组别 |
治疗前血糖
mg/d1 |
治疗后血糖
mg/d1 |
APC |
|
| DM1(n=12) |
331.6±59.5 |
269.3±33.0 |
4.95±1.24 |
| DM2(ｎ=10) |
313.5±44.3 |
287.1±35.8 |
6.48±2.02 |
| C1(n=10) |
73.3±7.6 |
76.6±9.7 |
3.61±1.12 |
| C2(n=10) |
71.9±6.9 |
74.2±8.6 |
5.08±1.43 |
|
| 表2 每两组APC比较检验的P值 |
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| 组别 |
DM2 |
C1 |
C2 |
|
| DM1(n=12) |
0.021 |
0.841 |
0.041 |
| DM2(ｎ=10) |
|
0.042 |
0.000 |
| C1(n=10) |
|
|
0.033 |
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讨论
糖尿病是一种可导致心、脑血管系统等严重并发症的常见病，其主要病变基础是血管损害。许多研究表明糖尿病伴随出凝血系统异常。人体抗凝系统主要由抗凝血酶肝素系统及血浆蛋白Ｃ系统共同组成，其中蛋白Ｃ系统具有较强的抗凝活性，约占全血抗凝系统的２０％～３０％，是体内的一种重要抗凝因子。蛋白Ｃ是一种维生素Ｋ依赖抗凝因子，平时以无活性酶原形式循环于血浆中，其被激活后通过灭活Ⅴａ和Ⅷａ因子及促进纤维蛋白溶解而发挥抗凝作用。
由于临床上常常很难确定糖尿病患者准确发病时间，并且患者常常联合应用多种药物治疗疾病，所以临床上难以准确判断ＡＰＣ在糖尿病早期是否出现异常及通心络胶囊干预的影响。为了克服上述影响，采取鼠糖尿病模型作为研究对象。
笔者研究表明，鼠糖尿病模型５周后即出现ＡＰＣ增高，说明糖尿病早期就可能存在蛋白Ｃ活化现象，其机制可能与糖尿病致血栓调节蛋白增高有关。血栓调节蛋白可同时结合凝血酶和蛋白Ｃ，可明显增高蛋白Ｃ的活性，对凝血酶的促凝活性进行下调，蛋白Ｃ活性增高可能是先于血管病变的间接征象，可能是糖尿病致血管病变的早期指标之一。本实验未能进行血管病理研究是一个缺憾。蛋白Ｃ活性增高也可能与糖尿病致血小板活化使蛋白Ｃ活性代偿性增高有关。如果蛋白Ｃ活性不能抵抗血小板活化等凝血系统增强因素，微血管病变可能较早发生。因此，及早使用抗血小板活性药物和（或）提高蛋白Ｃ活性的药物有着重要临床意义。也可能蛋白Ｃ活性增高是上述两种因素共同作用所致。
通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂，由人参、水蛭、土鳖虫、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片组成，具有益气活血、通络解痉之功效，在临床治疗心脑血管疾病中取得较好疗效。笔者就糖尿病致蛋白Ｃ活性增强，通过通心络胶囊灌胃进行干预研究。结果发现通心络能使正常鼠蛋白Ｃ活性增强，也能使蛋白Ｃ活性本已增强的糖尿病鼠的蛋白Ｃ活性进一步增强。这是令人鼓舞的，预示通心络胶囊不仅对心脑血管疾病有治疗作用，也可能对糖尿病致心脑血管疾病有预防作用。因此，传统医学对预防糖尿病血管病变及延迟糖尿病并发症发生发展，可能有一定的作为，值得进一步深入研究。
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