唐雪明 王正祥 邵蔚蓝 刘吉泉 方慧英 诸葛健
江南大学教育部工业生物技术重点实验室,无锡,214036
摘 要：在5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究, 通过提高通气量和改变搅拌转速,BP071可在发酵40 h内达到产酶高峰,酶活力最高可达244 80 u/mL.利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案. 发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE-A-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶,再经过CM-Sephadex-C -50、Sephadex-G-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶,酶纯度提高了76.2倍 .SDS-P AGE显示重组碱性蛋白酶分子量为28 kD.酶学性质研究表明,酶的最适作用pH为11,最适作用温度为60℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性.Ca2+、Mg2+对酶的稳定性有促进作用,Hg2+、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力.SDS和Urea对酶的活力无影响.
关键词：碱性蛋白酶, 基因工程菌BP071, 发酵条件, 重组酶的纯化及 性质
分类号：Q814 文献标识码：A
文章编号：1000-3061(2002)06-0729-06
