来源
2008-7-16 13:40:26
检测DNA-蛋白质交联的新方法
检测DNA-蛋白质交联的新方法
苏来;宋宏宇
将彗星实验进行改进以用于DNA-蛋白质交联作用的检测。利用甲醛对受试动物肝细胞的影响来判定此法是否适用于检测DNA-蛋白质交联。由于在实验中添加一定量的蛋白酶K,可使单细胞在电泳时产生更大的迁移,因此可以利用添加蛋白酶K前后的彗星尾距比来判断外来化合物对生物机体产生DNA损伤效应的时候是否有出现DNA-蛋白质交联作用。结果表明,该方法快速、经济、灵敏度较高,可以在单细胞水平对甲醛等强交联剂引发的不同组织的DNA-蛋白质交联效应进行检测,希望该方法能成为指示DNA交联能力的有用工具。
DNA交联是外来化学物作用于DNA所致的重要遗传损伤,与其他类型DNA损伤相比,DNA交联较难修复或易于发生易错修复,在细胞周期中维持时间较长。DNA-蛋白质交联(DPC)的存在阻滞了DNA的正常转录和复制,会导致染色体断裂、缺失,基因突变和细胞的死亡。因此WHO指出DPC可以作为机体潜在突变的分子标志物。故筛检环境化学物的DNA交联性损伤具有极其重要的意义。
然而,由于检测方法的局限,极大地制约了其应用。近年来,国外常有将彗星实验(Comet assay)用于检测DNA交联的报道,而国内却很少见,几乎都是用KCl-SDS沉淀法进行检测,但此方法费时且成本较高。本室在深人挖掘彗星实验的应用前景时,首次探讨了通过添加蛋白酶K来检测DNA交联的新思路,现报道如下。
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