球形芽胞杆菌C3-41磷酸果糖激酶的克隆、表达及基本生物活性
微生物学报Acta Microbiologica Sinica
48(5)：602~607;4 May 2008
球形芽胞杆菌C3-41磷酸果糖激酶的克隆、表达及基本生物活性
韩蓓1,2,蔡亚君1,胡晓敏1,袁志明1*
(1中国科学院武汉病毒研究所,武汉430071)
(2西安交通大学医学院,西安710061)
基金项目:中国科学院前沿方向性项目(950121)
*通讯作者。Tel:+86-27-97198195;Fax:+86-27-87198120;E-mail:yzm@wh.iov.cn
作者简介:韩蓓(1980?),女,陕西渭南人,讲师,博士,主要从事微生物分子生物学研究。E-mail:tydyhan@gmail.com
摘要：
【目的】球形芽孢杆菌缺乏EMP、HMP、ED途径的关键酶，如磷酸果糖激酶等被认为是其不能以糖类物质进行生长的主要原因。杀蚊球形芽孢杆菌C3-41全基因组序列分析表明，在染色体DNA上存在的磷酸果糖激酶基因pfk，为了进一步分析球形芽孢杆菌糖酵解途径，进一步确定磷酸果糖激酶在糖酵解途径中的功能。
【方法】通过pfk基因在球形芽孢杆菌菌株中的Southern-blot拷贝数鉴定，在C3-41 pfk基因克隆的基础上进行pfk基因在大肠杆菌中的融合表达、序列分析和序列比对等方法进行研究。
【结果】证明了球形芽孢杆菌pfk基因由960 bp核苷酸组成，表达42 kDa的PFK融合蛋白，有保守的底物结合域和ATP结合域，同时pfk基因重组表达质粒可以回复大肠杆菌pfk缺陷型菌株DF1020代谢糖的能力。
【结论】杀蚊球形芽孢杆菌C3-41的pfk表达产物具有磷酸果糖激酶活性，为今后深入研究球形芽孢杆菌产能代谢机理奠定了基础。
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