一株产紫杉醇罗汉松内生真菌的分离和鉴定

孙端方1,冉雪琴1,王嘉福1,2*

微生物学报Acta Microbiologica Sinica

48(5)：589~595;4 May 2008

一株产紫杉醇罗汉松内生真菌的分离和鉴定

孙端方1,冉雪琴1,王嘉福1,2*

(1贵州大学动物科学学院,2农业生物工程省级重点实验室,贵阳550025)

摘要：

【目的】紫杉醇是重要的抗癌药物，主要从罗汉松等植物中提取，为了保护罗汉松等种质资源，本文从罗汉松植株中分离产紫杉醇内生真菌，并对内生真菌所产紫杉醇的抗肿瘤活性进行了分析。

【方法】采用组织块法自罗汉松的根、茎、叶等组织中分离内生真菌；通过四唑蓝（Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT）比色法筛选有抗肿瘤活性的内生真菌菌株，通过薄层层析（Thin Layer Chromatography,TLC）和高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）对内生真菌所产活性物质进行鉴定；采用抽提法抽提内生真菌所产紫杉醇，应用Vero细胞对抽提的紫杉醇的活性进行了分析。

【结果】从罗汉松属（Podocrapus）植物中分离到155株内生真菌，其中28株内生真菌具有较高的抑癌活性。将其中一株菌株A2命名为EPTP-1，经形态学和分子分类学分析鉴定为

烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。菌株EPTP-1中抽提的紫杉醇5.553μg/L~555.3μg/L作用24h表现出明显的致细胞凋亡作用。菌株EPTP-1发酵5天时紫杉醇的产率为0.5578±0.0294 mg/L。

【结论】从罗汉松中分离到了一株产紫杉醇内生真菌EPTP-1，可作为紫杉醇类药物工业化生产的候选菌株。

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