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细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene Bacterio Matchtwo hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XLl一BlueMRF,报道基因产物以抗羧苄青零素和p半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT—DR4,pTRG—TRAIL与pBT—DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青零素(500μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG—TRAIL与pBT—OPG组共转化后在低浓度羧苄青零素(250μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X—Gal—PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG—TRAIL与pBT—LGF2,DBT—DR4、pBT—DR5或pBT-0PG与pTRG-Gal114组共转化后呈阴性。结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。


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