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截短型人bid基因的克隆、表达和促凋亡作用的研究

目的:探讨哉短型bid(truncated ated bid,tbid)基因的表达对Hela细胞的促进凋亡活性.方法:用RT-PCR法克隆人全长bid基因,测序正确后,通过PCR截去编码N末端60个氨基酸残基的基因,而获得tbid基因。将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2-ECFP中,用脂质体法转染Hela细胞。通过荧光显微镜、电子显微镜观察和TUNEL检测法,检测目的基因的表达对转染细胞的形态及生长状况的影响。结果:成功地构建了tbid基因的真核表达载体。以其转染Hela细胞后,tbid基因在细胞中得到表达,随后引起细胞荧光强度下降,生长状况不良甚至死亡。电镜观察及TUNEL检测的结果显示,许多细胞呈典型的凋亡特征。结论:tbid基因的表达可促进Hela细胞的凋亡。


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