Construction and Function Analysis of a CTAR-2 Region Mutant of the Epstein-Barr Virus-encoded Latent Membrane Protein-1
贺智敏 陈主初
摘 要：为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白-1(LMP1)的活性部位及细胞转化作用机制, 采用PCR方法构建LMP1羧基末端活化区-2(CTAR-2) 中384～386位密码子对应的氨基酸YYD→ID突变的重组体, 将此重组突变型LMP1(mt-LMP1)与野生型LMP1(wt-LMP1)分别与含有转录因子NF-κB或AP-1启动子序列的荧光素酶表达质粒共转染293细胞, 单光子检测仪测定比较二者活化转录因子的功能; 同时将mt-LMP1和wt-LMP1分别导入Rat-1细胞, 接触抑制试验比较二者对细胞的转化作用.发现: (1)与wt-LMP1相比, mt-LMP1对转录因子NF-κB的活化作用降低了80%左右, 对AP-1的活化作用全部消失; (2)mt-LMP1表达的Rat-1细胞集落形成数比wt-LMP1表达的细胞显著降低[(23±3)/皿对(357±19)/皿; (64±8)/皿对(408±40)/皿; n=3, P<0.001].这些结果表明CTAR-2中最后3位氨基酸 (384～386)是EB病毒LMP1的重要活性部位之一; LMP1致Rat-1细胞转化作用主要与其活化转录因子NF-κB或/和AP-1的功能有关.
关键词：EB病毒; 潜伏性膜蛋白; 突变; 核转录因子; 细胞转化
分类号：Q939 文献标识码：A
基金项目：美国中华医学基金会( CMB)基金资助项目
作者简介：贺智敏,联系人: Tel, 0731-4805447; Fax, 0731-4485482; e-mail, Hezhimin@yahoo.com.cn
作者单位：贺智敏（中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,长沙,410078）
陈主初（中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,长沙,410078）
