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猴ESc-615基因重组蛋白质片段的表达纯化和多克隆抗体的制备

胡志红  李彬  刘强  张永莲

 
胡志红(中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031)      
李彬(中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031)      
刘强(中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031)      
张永莲(中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031)

摘 要:ESc-615是从猕猴中克隆到的一个在附睾中特异性表达的新基因. 为了从蛋白质水平深入研究其在精子成熟中的作用, 在大肠杆菌中表达了该蛋白质的一条含310个氨基酸的肽段, 并用其免疫新西兰大白兔, 得到了滴度为100 000的抗血清; 用Western印迹方法鉴定发现该抗血清可检测到3 ng的抗原量; 并在大鼠附睾组织抽提液中检测到一种能与该抗血清作用的大小约63 kD的蛋白质, 此蛋白质大小与作者实验室在大鼠中克隆到的此基因的同源蛋白质相同; 利用该抗体通过免疫组化分析确定了ESc-615为分泌蛋白质, 并能与精子结合; 该抗血清经抗原吸附后阳性结果消失. 该高滴度多克隆抗体的获得为ESc-615功能的探索提供了一条途径.

关键词:ESc-615; 附睾; 重组蛋白质表达; 多克隆抗体

分类号:R959 文献标识码:A

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生物频道录入:生物编辑    责任编辑:生物编辑 


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