陈光宇 邹民吉 彭善云 王嘉玺
军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850
摘 要：采用RT-PCR方法从人外周血白细胞总RNA中钓取人可溶性B淋巴细胞刺激因子(human soluble B lymphocyte stimulator, hsBLyS)的cDNA片段, 再运用基因重组手段, 利用通用型质粒pBV220构建表达载体pBV220/hsBLyS. 经测序鉴定后, 以之为模板使用重叠PCR法扩增得到hsBLyS的两个点突变体hsBY-A(Cys146→Ala146) 和hsBY-V (Cys146→Val146)的基因片段, 构建表达载体pBV220/hsBY-A及pBV220/hsBY-V. 经测序无误后, 将上述3种载体分别转化大肠杆菌DH5α并诱导重组蛋白质表达, 薄层扫描结果显示3种蛋白质在DH5α中表达量都在20%～30%之间. 再分别运用变性、 凝胶过滤层析及复性等手段纯化目的蛋白质, 最后通过B淋巴细胞增殖实验检测纯化产物促人B细胞增殖的活性. 实验结果表明, 3种重组蛋白质都能明显刺激人B细胞增殖; 统计学检验显示, 突变体rhsBY-V较野生型rhsBLyS的促人B淋巴细胞增殖活性显著增强.
关键词：hsBLyS; 突变体; 原核表达; 包涵体; 细胞增殖
分类号：Q78 文献标识码：A
