邱全胜 王泽宙 蔡起贵 姜荣锡
邱全胜（北京师范大学生命科学学院,北京,100875）
王泽宙（北京师范大学生命科学学院,北京,100875）
蔡起贵（中国科学院植物研究所,北京,100093）
姜荣锡（中国科学院植物研究所,北京,100093）
摘 要：以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子,通过构建DHN1-mGFP4融合蛋白表达载体,研究了渗透胁迫条件下脱水蛋白DHN1的表达及其亚细胞分布的动态变化.采用PCR方法在脱水蛋白基因dhn1两端引入Xba I和BamH I限制性内切酶位点,克隆到质粒pBIN-35S mGFP4,构建DHN1-mGFP4融合蛋白表达载体,并采用基因枪转化猕猴桃(A.delicisoa)悬浮细胞.培养10h后观察到高效表达的GFP绿色荧光,绿色荧光只出现在细胞核内.提高培养介质渗透势后,可以诱导脱水蛋白向细胞质分布(主要集中在质膜周围),并且增加介质渗透势可以明显缩短细胞质出现绿色荧光的时间.蛋白合成抑制剂环己亚胺能够抑制细胞质绿色荧光的出现,暗示细胞质出现的脱水蛋白是诱导产生的结果.ABA可以明显促进细胞质绿色荧光的出现,并且随着介质渗透势的升高迅速缩短细胞质绿色荧光的出现时间.
关键词：猕猴桃悬浮细胞 渗透胁迫 脱水蛋白DHN1 绿色荧光蛋白(GFP) 瞬时表达 亚细胞分布 ABA
分类号：Q94 文献标识码：A
