李盛 赵志安 李明 顾真荣 白晨 黄伟达
李盛（复旦大学生命科学学院生物化学系,上海,200433）
赵志安（复旦大学生命科学学院生物化学系,上海,200433）
李明（复旦大学生命科学学院生物化学系,上海,200433）
顾真荣（上海农业科学院,上海,201106）
白晨（复旦大学生命科学学院生物化学系,上海,200433）
黄伟达（复旦大学生命科学学院生物化学系,上海,200433）
摘 要：从芽孢杆菌属短芽孢杆菌种分泌的胞外几丁质酶经过硫酸铵盐析、苯基琼脂糖疏水相互作用层析和DEAE阴离子交换层析第一次被提纯. 和其他来源的几丁质酶相比, 该纯酶的独特之处在于它是一个由两个完全相同的亚基以疏水相互作用聚合而成的二聚体. 常温下经过巯基乙醇处理后, 该酶在10%SDS聚丙烯酰胺电泳显示的分子量为85 kD. 沸水处理3 min或用 50 ℃的8 mol/L 尿素溶液处理10 min后, 该酶在10% SDS聚丙烯酰胺电泳显示的分子量为48 kD. 该酶的亚基解聚后, 活性丧失. 该酶的等电点为5.5, 水解几丁质的最适pH 为8.0, 最适温度为60 ℃. 该酶的酸碱稳定范围是pH 6.0 到10.0. Ag+ 和巯基乙醇能抑制酶活性. 该纯酶的N端10个氨基酸残基依次是AVSNSKIIGY, 表明该酶是一个尚未发现的新几丁质酶. 该纯酶水解几丁质的特征研究表明该酶属一种内切几丁质酶, 不具备外切几丁质酶的活力. 和其他几丁质酶相比, 该酶具有高度的热稳定性和蛋白水解酶抗性, 因此可用于生物控制领域.
关键词：内切几丁质酶; 芽孢杆菌属短芽孢杆菌种; 提纯; 二聚体; 二硫键
