方六荣 陈焕春 肖少波 张辉 牛传双
华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒研究室,武汉,430070
摘 要：将绿色荧光蛋白突变体M1(EGFP S147/P)基因融合到伪狂犬病毒(PRV)非必需糖蛋白gG的第8个氨基酸下游, 通过同源重组、 空斑纯化和PCR筛选获得能表达M1并导致gG基因部分缺失的重组病毒gG-/M1+. 重组病毒经Southern杂交、 Western印迹和荧光观察证实构建正确. 纯化的重组病毒以低感染指数接种PK-15细胞, 在感染早期(6 h)就能观察到荧光, 随着病毒的增殖, 荧光逐渐增强(24～36 h), 直至完全病变, 荧光淬灭. 进一步对重组病毒gG-/M1+与亲本株gG-/LacZ+、野毒株的增殖特性进行比较, 发现3种毒株在增殖滴度上无显著差异. 上述结果表明构建的PRV gG-/M1+突变株能作为活细胞示踪实时监测病毒感染的动态分析.
关键词：伪狂犬病毒; 绿色荧光蛋白突变体; 标记; 增殖特性
分类号：R373.9 文献标识码：A
