上接“蛋白芯片生产用醛基化玻片制备的条件优化及初步检定（一）”
2.3 蛋白芯片的线性及灵敏度的检测
图3为各浓度梯度点样后，用二抗荧光标记检测后进行扫描的图象，从左至右分别为2×40~2×4-9mg/ml共10个浓度梯度，每个浓度有上下两点。
图4中列出了从2~2×4-9mg/ml各浓度梯度点的平均荧光强度对数值，可以看出荧光信号最底检出值为2×4-8mg/ml；2~2×4-7mg/ml各点具有明显的线形相关，相关系数R的平方值为0.95（图5）。
3. 讨论
本实验以人IgG抗体为结合蛋白，通过荧光标记的二抗检测抗体蛋白，根据荧光扫描强度来显示蛋白结合的量，确定了氨基化和醛基化试剂的饱和浓度分别为5%和2.5%，作用饱和时间分别为30 min和60 min，为蛋白芯片的制备工艺提供了可供参考的指标。
采用最佳条件制备的蛋白芯片，经过人IgG抗体的结合与检测，结果具有较宽的线性范围2~2×4-7mg/ml，最低检出浓度为2×4-8mg/ml。
本文中所有实验均在室温（18~25℃）条件下进行，其他温度对这些参数的影响还不清楚。
在蛋白芯片的制备和检测过程中，我们发现，蛋白点样缓冲液、封闭液，蛋白结合反应时间，荧光标记二抗的浓度等因素对荧光信号的强弱均有影响，在制备和检测过程中这些因素都设法保持恒定。
在激光共聚扫描仪检测过程中，我们发现扫描仪的激光强度和光电倍增管的参数调节对荧光信号的影响比较大，随着激光强度和光电倍增管的参数的增加，信号强度也随之加大，但增加到一定程度时，本底背景加大的趋势也增加，本实验发现激光强度和光电倍增管的参数均设定为80%时，扫描结果具有较底的背景值，而信号强度也较强。
总之，蛋白芯片的制备和应用过程中，制备质量好、结合力高的芯片是其中的基础环节，另外还需考虑其他的影响因素，如对于不同的检测蛋白或项目还要考虑其特有的影响因素。
