向开军 余红秀 邹春森 袁培华 刘兢
中国科学技术大学生命科学学院,合肥,230027
摘 要：将皖南尖吻蝮蛇毒I型金属蛋白酶acutolysin A基因克隆进原核表达载体pBAD/gIIIA后得到重组表达质粒pDS. 在0.02%的L-(+)-阿拉伯糖的诱导下, 质粒pDS在E.coli TOP10中表达了重组acutolysin A. 与其天然形式相比, 重组蛋白质在N端和C端各增加了22个和8个氨基酸残基(均源于载体序列), 并以包含体的形式存在于胞质中, 表达量约占菌体总蛋白质的5%～10%. 在经8 mol/L尿素或6 mol/L盐酸胍变性及体外复性后, 重组蛋白质获得了良好的免疫学及生物学活性. Western 印迹及ELISA实验表明, 天然金属蛋白酶acutolysin A与重组蛋白质具有良好的免疫反应相关性. 动物实验表明, 复性的重组蛋白质能明显引起皮下出血, 其最低出血剂量约为20 μg左右 . 1 mmol/L EDTA、 1 mmol/L EGTA及3 mmol/L咪唑均能不同程度的抑制天然及重组金属蛋白酶的出血活性. PMSF没有明显的抑制效果. 并对出血毒金属蛋白酶的出血机制进行了探讨.
关键词：蛇毒金属蛋白酶; 表达; 重折叠; 出血活性
分类号：Q5 文献标识码：A
