傅奕 裴冬生 赵惠仁
徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,徐州 221002
摘 要：为研究人白细胞介素18(hIL-18)中一些氨基酸残基对IL-18功能的影响,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL-18突变体hIL-18D126N、hIL-18D130K、hIL-18D134K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达,3个突变体占菌体总蛋白质的15%～31%以上。SDS-PAGE证实,表达的蛋白质以包含体形式存在。包含体经超声破碎,2mol/L尿素洗涤,8mol/L尿素溶解,SephadexG-75柱纯化后,纯度均可达95%以上。Western印迹表明3个突变体与野生型hIL-18具有相同的免疫原性。纯化的突变体蛋白质经复性后,以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)的能力为指标检测其活性,结果显示3个突变体的生物学活性分别为野生型IL-18的32%、8%、10%,表明hIL-18中126、130、134位的天冬氨酸(Asp)对其功能是必需的。
关键词：人白细胞介素18；蛋白质结构与功能；定点诱变；干扰素-γ
分类号：Q5,Q7 文献标识码：A
